In-Fusion® HD Cloning Kit

In-Fusion® HD Cloning KitとA社同等品の比較実験（TB USA社取得データ）

方法

  • クローニングベクターにはBamH Iで切断したpUC19を使用した。
  • 反応条件は各社推奨のプロトコールに従った。
  • A社製品の反応時間は15～60分の範囲のため、マルチクローニングの場合のみ60分の反応条件も行った。
  • 形質転換にはクロンテックの「Stellar Competent Cells」を使用した。
  • 「目的クローンの割合」は、「Vector ＋ Insert」で出現したコロニーから26個をピックアップしてシーケンスを行い、正しい配列のコロニー数から算出した。

(1) マルチクローニングの場合

2.7 kbのベクターに、MBP（1.1 kb）、PROF12（0.7 kb）、AcGFP（0.7 kb）の3種類のインサートを同時にクローニングするマルチクローニングを行った。

In-Fusion HD CloningA社
反応条件50℃、
15分		50℃、
15分		50℃、
60分
Vector ＋ Insert89コロニー111コロニー392コロニー
Negative Control
（no insert）		1コロニー39コロニー78コロニー
目的クローンの割合100％
（26/26）		19％
（5/26）		73％
（19/26）

＜結果＞

・In-Fusion Kitに比べA社キットが、Negative Controlのコロニー出現数が圧倒的に多かった。
・目的クローンの割合も、In-Fusion Kitが高かった。

(2) シングルクローニングの場合

2.7 kbのベクターに、1種類のフラグメント（MBP；1.1 kb）のシングルクローニングを行った。

In-Fusion HD CloningA社
反応条件50℃、15分50℃、15分
Vector ＋ Insert635コロニー401コロニー
Negative Control
（no insert）		1コロニー39コロニー
目的クローンの割合100％（26/26）96％（25/26）

＜結果＞

・In-Fusion Kitに比べA社キットが、Negative Controlのコロニー出現数が多かった。
・目的クローンの割合には大きな差がみられなかった。

まとめ

In-Fusion Kitの方がバックグラウンドが低く、正確性の高いクローニング結果が得られた。

  In-Fusion® HD Cloning Kit