EHEC (O antigens) PCR Typing Kit

全O血清群参考株を用いた特異性の評価

EHEC (O antigens) PCR Typing Kit(製品コード RR133A)

大腸菌のO 血清群はデンマーク国立血清学研究所(Statens Serum Institut: SSI)により現在のところO1からO187までが定められており、3種類の亜(O18ab/ac、 O28ab/ac、O112ab/ac)と6種類の欠番(O31、O47、O67、O72、O94、O122)があるために184種類のO血清群が認められている。本評価ではそれら全184種類のSSI由来参考株から精製したゲノムDNAを用いた。それぞれのDNA濃度を5 ng/μlに調整したプールDNA(5種類のDNAを混和-表1:PT01~PT37)を用いて特異性の評価を行った。O血清群に対するPCR増幅産物(バンド)が確認されたプールDNA(PT06、PT20、PT22、PT24、PT29、PT31、PT33)について(図1)、各プールに含まれる5種類の単独DNAを用いて再度増幅の確認を行った(図2)。その結果、判定に関わる範囲内(100~1,500 bp)において非特異的なバンドは確認されず、7種類の対象O血清群株のみでバンドが確認された。以上の結果より、本キットの各対象O血清群に対する特異性が確認された。

全プールDNA を用いたPCR キットの結果

PT06:O25、O26、O27、O28ab、O28ac
PT20:O100、O101、O102、O103、O104
PT22:O110、O111、O112ab、O112ac、O123
PT24:O119、O120、O121、O123、O124
PT29:O144、O145、O146、O147、O148
PT31:O154、O155、O156、O157、O159
PT33:O164、O165、O166、O167、O168
図1.全プールDNA を用いたPCR キットの結果


単独DNAを用いたPCR キットの結果

単独DNAを用いたPCR キットの結果
O血清群 PCR産物のサイズ
O26241 bp
O103716 bp
O111451 bp
O121193 bp
O145132 bp
O157292 bp
O1651,042 bp
stx 1348 bp
stx 2584 bp
eae881 bp
図2.単独DNAを用いたPCRキットの結果(プールDNAでバンドが検出されたもののみ)

表1.参考株とプールDNA番号の対応表
O血清群
プールDNA 番号
O血清群
プールDNA番号
O血清群
プールDNA番号
O血清群
プール DNA 番号
O1
PT01
O51
PT11
O105
PT21
O154
PT31
O2
O52
O106
O155
O3
O53
O107
O156
O4
O54
O108
O157
O5
O55
O109
O158
O6
PT02
O56
PT12
O110
PT22
O159
PT32
O7
O57
O111
O160
O8
O58
O112ab
O161
O9
O59
O112ac
O162
O10
O60
O113
O163
O11
PT03
O61
PT13
O114
PT23
O164
PT33
O12
O62
O115
O165
O13
O63
O116
O166
O14
O64
O117
O167
O15
O65
O118
O168
O16
PT04
O66
PT14
O119
PT24
O169
PT34
O17
O68
O120
O170
O18ab
O69
O121
O171
O18ac
O70
O123
O172
O19
O71
O124
O173
O20
PT05
O73
PT15
O125ab
PT25
O174
PT35
O21
O74
O125ac
O175
O22
O75
O126
O176
O23
O76
O127a
O177
O24
O77
O128
O178
O25
PT06
O78
PT16
O129
PT26
O179
PT36
O26
O79
O130
O180
O27
O80
O131
O181
O28ab
O81
O132
O182
O28ac
O82
O133
O183
O29
PT07
O83
PT17
O134
PT27
O184
PT37
O30
O84
O135
O185
O32
O85
O136
O186
O33
O86
O137
O187
O34
O87
O138
 
O35
PT08
O88
PT18
O139
PT28
O36
O89
O140
O37
O90
O141
O38
O91
O142
O39
O92
O143
O40
PT09
O95
PT19
O144
PT29
O41
O96
O145
O42
O97
O146
O43
O98
O147
O44
O99
O148
O45
PT010
O100
PT20
O149
PT30
O46
O101
O150
O48
O102
O151
O49
O103
O152
O50
O104
O153

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