DEF-CS 500を用いたiPS細胞のフィーダーフリー培養への移行例
マウスフィーダー細胞上で維持培養したヒトiPS細胞株（201B6, 201B7）をCellartis DEF-CS 500 Culture Systemにてフィーダーフリー培養へ移行を行った。
方法
マウスフィーダー細胞（MEF：MMC処理STO細胞使用）上で維持培養したヒトiPS細胞株
↓ TrypLE Select（Life Technologies、Cat. No.12563-029）によりsingle cellに分散
↓ 継代（Passage 1）
DEF-CS完全培地（GF-1、GF-2、GF-3含有）にて細胞を播種
細胞密度：2×104 cells/cm2
注：細胞株の種類によっては、細胞播種密度や培地交換頻度は変わる場合があります。
↓ TrypLE Select（Life Technologies、Cat. No.12563-029）によりsingle cellに分散
↓ 継代（Passage 1）
DEF-CS完全培地（GF-1、GF-2、GF-3含有）にて細胞を播種
細胞密度：2×104 cells/cm2
↓ 培地交換（※）
↓ 継代（Passage 2）
DEF-CS完全培地（GF-1、GF-2、GF-3含有）にて細胞を播種
細胞密度：2×104 cells/cm2
↓ 培地交換（※）
↓ 細胞を回収し、FACS解析
↓ 継代（Passage 2）
DEF-CS完全培地（GF-1、GF-2、GF-3含有）にて細胞を播種
細胞密度：2×104 cells/cm2
↓ 培地交換（※）
↓ 細胞を回収し、FACS解析
（※）培地交換のスケジュール
day1：培地交換
day2：なし
day3：培地交換
day4：培地が黄色くなっていたら交換
day5：培地交換
day6：継代
day1：培地交換
day2：なし
day3：培地交換
day4：培地が黄色くなっていたら交換
day5：培地交換
day6：継代
注：細胞株の種類によっては、細胞播種密度や培地交換頻度は変わる場合があります。
結果
Passage 1
図1-1. 移行後（Passage1)のiPS細胞の形態
Passage 2
図1-2. 2継代後の細胞の形態
図2. 未分化マーカーの発現確認
2継代後の細胞を回収し、未分化マーカーTRA1-60、SSEA4の発現をフローサイトメトリー解析した。
まとめ
- Cellartis DEF-CS 500 Culture Systemを利用することにより、オンフィーダー培養したヒトiPS細胞をフィーダーフリー培養へ簡単に移行することができた。
- Cellartis DEF-CS 500 Culture Systemにてフィーダーフリー培養したヒトiPS細胞の未分化マーカー（TRA-1-60, SSEA-4 )発現をFACS解析した結果、オンフィーダー培養同様の陽性率を示し、未分化状態を維持していることが確認できた。
