CHOgro® Expression Systemの他社システムとの比較
方法
＜実験1：通常培養時の細胞密度と生存率の推移＞
125 mlバッフル付きフラスコ（Corning, 431407）内の、培地30 mlにFreeStyle CHO-S細胞を播種し、培養した（37℃, 8％ CO2, 125 rpm）。使用培地と、培養開始時の細胞密度は以下の表の条件で行った。
培養開始から数日間、定期的に培養液を採取し、培養細胞数・細胞生存率の測定を行った。
| 条件1 | 条件2 | |
|---|---|---|
| 培地 | CHOgro Expression medium | A社 medium |
| 細胞 | FreeStyle CHO-S cells | FreeStyle CHO-S cells |
| 培養開始時の細胞密度 | 0.33×106 cells/ml | 0.33×106 cells/ml |
＜実験2：目的タンパク質の発現量の比較＞
125 mlバッフル付きフラスコ（Corning, 431407）内の、培地30 mlにFreeStyle CHO-S細胞を播種し、培養した（37℃, 8％ CO2, 125 rpm）。使用した培地とトランスフェクションは以下の表の条件で行い、bovine RARRES2 (サイトカイン)発現ベクターを細胞へ導入した。
トランスフェクション後から数日間、定期的に培養液を採取し、培養細胞数・細胞生存率の測定を行った。
また、トランスフェクション後、2日おきに培地をサンプリングし、 培地1 μl/laneをウェスタンブロットに供した。
| 条件3 | 条件4 | |
|---|---|---|
| 培地 | CHOgro Expression medium | A社 medium |
| 細胞 | FreeStyle CHO-S cells | FreeStyle CHO-S cells |
| トランスフェクション時の細胞密度とプラスミド量 | 2.0×106 cells/ml 30 μg plasmid | 1.0×106 cells/ml 37.5 μg plasmid |
| トランスフェクション試薬：DNAの量比 | 1:1 | 1:1 |
| 使用したトランスフェクション試薬 | TransIT-PRO Reagent | A社試薬 |
結果
＜実験1：通常培養時の細胞密度と生存率の推移＞
◆細胞密度と生存率の推移
◆培養3日目の細胞塊の発生状況
CHOgroでは細胞塊の発生がほぼ見られなかった。
＜実験2：目的タンパク質の発現量の比較＞
◆トランスフェクション後の細胞密度と生存率の推移
◆ウェスタンブロットによるタンパク質発現の確認
Expression vector：pSecTag2A
Inserted gene：bovine RARRES2（サイトカイン）
WB抗体：抗bovine RARRES2 rabbit polyclonal IgG
M：molecular marker
Gro：CHOgro expression system
A：A社 expression system
A社systemでは発現量が低く、Day7において検出できる量を発現したが、CHOgroではDay3よりタンパク質の発現と分泌が確認され、タンパク質発現量が改善された。Inserted gene：bovine RARRES2（サイトカイン）
WB抗体：抗bovine RARRES2 rabbit polyclonal IgG
M：molecular marker
Gro：CHOgro expression system
A：A社 expression system
データご提供：東北大学大学院 農学研究科 鈴木 裕様
