ヒト由来cDNAを鋳型としたqPCR反応比較(1)
方法
ヒト由来cDNAを鋳型として各社リアルタイムPCR用スタンダード試薬を用いて反応を行った。
使用機器：Thermal Cycler Dice Real Time System II （製品コード TP900/TP960）
弊社試薬：
PrimeScript RT reagent Kit（Perfect Real Time）（製品コード RR037A/B）
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus）（製品コード RR820S/A/B）
Template：HL60 total RNA
Primers：Perfect Real Timeサポートシステム (PRTSS) で設計
弊社試薬：
PrimeScript RT reagent Kit（Perfect Real Time）（製品コード RR037A/B）
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus）（製品コード RR820S/A/B）
Template：HL60 total RNA
Primers：Perfect Real Timeサポートシステム (PRTSS) で設計
＜リアルタイム反応条件＞
Holding
1 cycle
95℃、30秒
2 Step PCR
40 cycles
95℃、5秒
60℃、30秒
反応組成） ＜1反応あたり＞
Holding
1 cycle
95℃、30秒
2 Step PCR
40 cycles
95℃、5秒
60℃、30秒
| 試薬 | 使用量 | 最終濃度 | |
| TB Green Premix Ex Taq II（2×） | 12.5 μl | 1× | |
| PCR Forward Primer（10 μM） | 1 μl | 0.4 μM | |
| PCR Reverse Primer（10 μM） | 1 μl | 0.4 μM | |
| Template（cDNA合成反応液） | 2 μl | ||
| 滅菌精製水 | 8.5 μl | ||
| total | 25 μl |
結果
他社の同タイプの試薬に比べて反応効率が良いため、より短い伸長時間で安定した増幅が可能であった。
備考
●関連製品
TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)[RR420S/A/B]
TB Green Premix DimerEraser (Perfect Real Time)[RR091A/B]
PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)[RR037A/B]
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time)[RR036A/B]
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)[RR047A/B]
● 参考文献
吉崎美和, 向井博之 (2005)実験医学別冊 バイオ実験で失敗しない！「検出と定量のコツ」, 第3章 核酸の 検出と定量のコツ 4. リアルタイム定量PCRのコツ, 120-126.
吉崎美和, 向井博之 (2008)実験医学別冊 原理からよくわかる「リアルタイムPCR実験ガイド」 [3] 1) リアル タイムRT-PCR法による遺伝子発現解析, 39-43.
TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)[RR420S/A/B]
TB Green Premix DimerEraser (Perfect Real Time)[RR091A/B]
PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)[RR037A/B]
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time)[RR036A/B]
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)[RR047A/B]
● 参考文献
吉崎美和, 向井博之 (2005)実験医学別冊 バイオ実験で失敗しない！「検出と定量のコツ」, 第3章 核酸の 検出と定量のコツ 4. リアルタイム定量PCRのコツ, 120-126.
吉崎美和, 向井博之 (2008)実験医学別冊 原理からよくわかる「リアルタイムPCR実験ガイド」 [3] 1) リアル タイムRT-PCR法による遺伝子発現解析, 39-43.
