ヒト由来cDNAを鋳型として各社高速反応タイプのリアルタイムPCR試薬を用いて反応を行った。
使用機器: Thermal Cycler Dice Real Time System
II(製品コード TP900/TP960:終売)
弊社試薬: PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)(
製品コード RR037A/B)
TB Green
Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)(
製品コード RR420S/A/B)
Template: HL60 total RNA
Primers :
Perfect Real Timeサポートシステム(PRTSS) for インターカレーターで設計
<リアルタイム反応条件>
Holding
1 cycle
95℃、30秒
2 Step PCR
40 cycles
95℃、5秒
60℃、30秒
Dissociation
qPCR反応組成 <1反応あたり>
試薬 | 使用量 | 最終濃度 |
TB Green Premix Ex Taq (2×) | 12.5 μl | 1× |
PCR Forward Primer(10 μM) | 0.5 μl | 0.2 μM |
PCR Reverse Primer(10 μM) | 0.5 μl | 0.2 μM |
Template(cDNA合成反応液) | 2 μl | |
滅菌精製水 | 9.5 μl |
total | 25 μl | |