phi29 DNA Polymerase

（A）2時間の反応後、電気泳動を行い増幅したDNAを確認した。
その結果、phi29 DNA Polymerase（Takara）は、他社の酵素と比べてより少ない鋳型量で高いDNA収量が得られ、反応液に鋳型を含まないNTCの増幅は確認されなかった。一方で、感度の高い他社酵素もあるが、いずれもNTCにおいてDNA増幅が確認された。

（B）0.5 ngのpUC19 DNAを鋳型とした増幅反応2時間後および4時間後に、反応液20 µl当たりのDNA収量を測定した。
その結果、phi29 DNA Polymerase（Takara）は高いDNA収量を得られることを確認した。また、そのDNA収量は他社の変異体酵素にも匹敵するということが示された。

1. RCA (Rolling Circle Amplification)
2. WGA (Whole Genome Amplification)

1. 本酵素の激しい攪拌は行わないでください。
2. 本製品を使用する際は、DNA汚染によるコンタミを防止するために実験台や実験器具を水拭きし、クリーンベンチ内で作業することをお勧めします。
3. 本酵素を室温で放置すると酵素活性が低下する場合があります。使用する際は氷上において使用してください。

1. 以下の試薬を調製する。
   

   試薬	濃度	使用量	終濃度
   Nuclease-free water	-	x μl	-
   10×phi29 DNA Polymerase Reaction Buffer	10×	2 μl	1×
   3' PS-modified Random Hexamer＊1、2	500 μM	2 μl	50 μM
   dNTP Mixture	各10 mM	4 μl	各2 mM
   DNA template＊3	-	0.5 ng	25 pg/μl
   Total		19 μl

2. 95℃で5分間加熱後、氷上で2分間冷却する。
3. 10 U/μlのphi29 DNA Polymeraseを1 μl^＊4添加し、優しく混合する。
4. 30℃で2時間^＊5反応させる。
   
   
   *13' Phosphorothioate-modified Random Hexamer（製品コード 3807：別売り）のコンポーネント。
   
   
   *2 特異的プライマーを使用する場合（例：終濃度 各5 μM）は、phi29 DNA polymeraseの3’-5’エキソヌクレアーゼ活性によるプライマーの分解を防ぐために3’末端が保護修飾されたプライマーを高く推奨します。
   
   
   *3 プラスミドDNA、ゲノムDNA、一本鎖DNAを鋳型として使用可能です。
   それぞれの推奨濃度は以下のとおりです。
   プラスミドDNA 50 pg～5 ng/rxn
   ゲノムDNA 5 pg～5 ng/rxn
   一本鎖DNA 5 pg～5 ng/rxn
   
   
   *4 使用量を上げる（例：20 U）ことで、より高収量が得られる場合があります。
   
   
   *5 反応時間を延長する（4～16時間）ことで、より高収量が得られる場合がありますが、鋳型を添加しないサンプルにおいても非特異的増幅が起こる可能性があります。