Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

Cloned
反応用バッファー添付
製品コード メーカー
略称
製品名 容量 価格(税別)
キャンペーン価格
特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報
参考資料 カート
Takara Code
2230A

TKR

タカラバイオ(株)
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
修飾酵素
300 U ¥14,000
¥11,200
2021/07/01~
2021/08/31

説明書・データシート・ベクター情報
2230A
2230B(A×5)

TKR

タカラバイオ(株)
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
修飾酵素
1,500 U ¥54,000
¥43,200
2021/07/01~
2021/08/31

説明書・データシート・ベクター情報
2230B(A×5)
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製品説明

本酵素は反応に鋳型を必要とせず、一本鎖または二本鎖DNAの3’-OH末端にデオキシヌクレオチドを重合する反応を触媒する。プライマーとなるには最低3塩基以上のオリゴデオキシヌクレオチドが必要である。
TdTを用いたホモポリマーの付加反応の条件は、
  1. 付加する塩基の種類(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)
  2. バッファー中の二価イオンの種類(Mn2+、Co2+、Mg2+
  3. 付加されるDNAの末端構造(突出3’-OH末端、平滑末端、陥没3’-OH末端)
等に影響されるため、状況に応じた最適条件を見つけることが必要である。

保存

-20℃

起源

E. coli carrying the plasmid which encodes the gene of terminal deoxynucleotidyl transferase

濃度

7~15 U/μl

形状

60 mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.2)
150 mMKCl
1 mMDTT
50%グリセロール

添付Buffer組成(5×)

(Tailing反応用)
500 mMHEPES(pH7.2)
40 mMMgCl2
0.5 mMDTT
0.1%BSA[別添付]

活性の定義

DNase処理後熱変性仔牛胸腺DNA(活性化仔牛胸腺DNA)をイニシエーターとして用い、37℃、pH7.2において、1時間に1 nmolの[3H]dATPを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

100 mM カコジル酸ナトリウム緩衝液(pH7.2)
8 mM MgCl2
0.1 mM DTT
0.024% BSA
160 μg/ml 活性化仔牛胸腺DNA
0.5 mM [3H]dATP

品質管理データ

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis(CoA)をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

使用上の注意

TdTの反応条件は、付加する塩基の種類(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)、バッファー中の二価イオンの種類(Mn2+、Co2+、Mg2+)、および付加されるDNAの末端構造(突出3'-OH末端、平滑末端、陥没3'-OH末端)等に影響され、状況に応じた最適条件を見つけることが必要である。一般に、dATP、dTTPを付加する場合はCo2+を含むバッファーが、dCTP、dGTPを付加する場合はMn2+を含むバッファーが最適である。
また15~40 baseのデオキシヌクレオチドを付加する最適条件は、突出3'-OH末端の場合dNTPとDNAのモル比が20:1、陥没3'-OH末端の場合100:1である4, 5)

* CoCl2 Buffer

100 mMカコジル酸ナトリウム(pH7.2)
1 mM CoCl2
0.1 mMDTT

MnCl2 Buffer

100 mM カコジル酸ナトリウム(pH7.2)
2 mM MnCl2
0.1 mM DTT

用途

  • 標識dNTPまたはddNTPによるDNAの3’末端標識
  • Okayama-Berg法によるベクターcDNAに相補的なホモポリマーの付加

一般的性質

  • 分子量
    60,000(遺伝子より推定)
  • 至適pH
    pH7.2
  • 補因子
    Mg2+、Mn2+、CO2+等の二価イオンのうちいずれかを要求する。
  • 阻害剤
    多くの陽イオン、陰イオンで阻害される。
  • その他
    ヌクレオチドアナログ(5-methyl-dCTP、6-O-methyl-dGTP等)も基質となり得る。ジデオキシチミジン3リン酸やコルディセピン3リン酸はターミネーターとなる。
注意事項
  • 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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