反応用バッファー添付
製品説明
本酵素は、Avian myeloblastosis virusから単離された、分子量約157,000 daltonsのαβ型holoenzymeの逆転写酵素である。本酵素は、Nuclease-freeにまで高純度に精製したものであり、約10 kbのRNAを鋳型としたcDNA合成に使用できることを確認している。本酵素はcDNA合成活性とともに、RNase H活性も保持している。
保存
－80℃凍結保存（数回の凍結、融解の繰り返しではほとんど活性は低下しないが、なるべく避けること）または短期間（6ヵ月）であれば－20℃保存でもよい。
濃度
15～40 units/μl
形状
| 200 mM | リン酸カリウム緩衝液（pH7.2） |
| 2 mM | DTT |
| 0.2％ | Triton X-100 |
| 50％ | グリセロール |
添付Buffer組成（cDNA合成用、10×/5×）
| 250 mM | Tris-HCl（pH8.3） |
| 500 mM | KCl |
| 20 mM | DTT |
| 50 mM | MgCl2 |
注意）長鎖cDNAの合成には、添付Bufferは 1/10希釈での使用が望ましい。
活性の定義
Poly（rA）・oligo（dT）12－18を鋳型／プライマーとし、37℃で10分間に1 nmolの[3H] dTTPを酸不溶性沈殿物に取り込む活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 50 mM | Tris-HCl（pH8.3） |
| 40 mM | KCl |
| 6 mM | MgCl2 |
| 4 mM | DTT |
| 0.4 mM | Poly（rA）・（dT）12-18 |
| 0.5 mM | [3H]dTTP |
| 2～4 U | RTase XL (AMV) |
品質検定
以下の方法により、メーカーにて品質検定が行われている。
1. cDNA合成反応
Poly A-tailed RNA Ladder（0.5 ～ 9.0 kb）1.0 μgと本酵素5.0 Uを41℃で1時間反応後、アルカリゲル電気泳動およびTCA沈澱により、転写効率および完全長cDNA 合成率を確認している。
2. RNase Assay
本酵素とRNA Ladder（0.5～9.0 kb）を1 μg RNAあたり20 Uの割合で37℃にて2時間反応させ、RNAのアガロースゲル電気泳動により、RNase A当量として8×10-8 U以下であることを確認している。
3. DNase Assay（endonuclease、exonuclease）
50 Uの本酵素と0.5 μgのφX174 Hae III fragmentsを、反応液中37℃にて3時間反応させ、電気泳動によりDNase I当量として1.25×10-4 U以下であることを確認している。
1. cDNA合成反応
Poly A-tailed RNA Ladder（0.5 ～ 9.0 kb）1.0 μgと本酵素5.0 Uを41℃で1時間反応後、アルカリゲル電気泳動およびTCA沈澱により、転写効率および完全長cDNA 合成率を確認している。
2. RNase Assay
本酵素とRNA Ladder（0.5～9.0 kb）を1 μg RNAあたり20 Uの割合で37℃にて2時間反応させ、RNAのアガロースゲル電気泳動により、RNase A当量として8×10-8 U以下であることを確認している。
3. DNase Assay（endonuclease、exonuclease）
50 Uの本酵素と0.5 μgのφX174 Hae III fragmentsを、反応液中37℃にて3時間反応させ、電気泳動によりDNase I当量として1.25×10-4 U以下であることを確認している。
用途
- 1st strand cDNAの合成
- RNA-PCR
- cDNAプローブの調製
起源
Avian myeloblastosis virus（AMV）
一般的性質
- 分子量
αβ型：157,000
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