反応用バッファー添付
保存
－20℃
濃度
20 U/μl
形状
| 20 mM | リン酸カリウム緩衝液（pH7.2） |
| 50 mM | KCl |
| 0.05 mM | EDTA |
| 1 mM | DTT |
| 0.02％ | BSA |
| 50％ | グリセロール |
添付Buffer組成（10×）
| 350 mM | Tris-HCl、pH8.0 |
| 720 mM | KCl |
| 50 mM | MgCl2 |
| 50 mM | DTT |
| 50 mM | スペルミジン |
| 0.1％ | BSA［別添付］ |
触媒する反応
1．環状のスーパーコイル分子のスーパーコイル状態を解消する。
2．一本鎖の環状DNA分子内に、DNA鎖の結び目を作ったり（knotting）、それをほどいたりする（unknotting）作用がある。
3．互いに相補的な塩基配列を持つ環状一本鎖DNAから、二本鎖の閉環状DNA分子を形成する反応を行う。
4．2つの環状二本鎖DNA分子のどちらかの分子にDNA鎖の切れ目が存在する場合、2つの分子の連結反応（catenation）、あるいはその逆の反応（decatenation）を起こす。
(参考文献3）より引用）
活性の定義
0.5 μg/50 μlのsupercoiled pBR322 DNAを37℃で30分間に100％ relaxed formに転換させる酵素活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 35 mM | Tris-HCl（pH8.0） |
| 72 mM | KCl |
| 5 mM | MgCl2 |
| 5 mM | DTT |
| 5 mM | スペルミジン |
| 0.01％ | BSA |
| 0.5 μg/50 μl | supercoiled pBR322 DNA |
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
使用上の注意
- 添付反応液にはスペルミジン（終濃度5 mM）が添加してある（スペルミジンを反応液に添加しない場合、活性が1/20程度に低下することがある）。
- pBR322 DNAや
Φ X174 DNAのRF I（スーパーコイル分子）を、DNA Topoisomerase I で反応させた後、アガロースゲル電気泳動を行うと、ゲル中にエチジウムブロマイド（EtBr）が含まれている場合、反応の前後でバンドの位置に変化が起こらない。
これは、DNA Topoisomerase I によりrelax型に転換したDNAが、EtBrの影響で再びスーパーコイル状態になってしまうからである。
そのためDNA Topoisomerase I 活性を測定するときは、EtBrを含まないアガロースゲルで電気泳動を行い、泳動終了後EtBrで染色をすることが必要である。 - 10×添付Bufferに0.1％ウシ血清アルブミン溶液を直接加えると多量の白沈が生じるので、反応液を調製する際は次の順番で試薬を加える。
滅菌精製水→10×添付Buffer→0.1％ BSA→基質DNA - 本酵素はガラスやプラスチックに対する吸着性が強く、反応に際しては、ウシ血清アルブミン（BSA）を添加することが望ましい。
用途
- DNAのコンフォメーションの変換と解析
起源
Calf thymus1, 2）
一般的性質
- 阻害剤
0.2 M以上の一価カチオン（K＋、Na＋）
- 注意事項
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