心臓cDNAライブラリー

製品コード メーカー
略称
製品名 容量 価格(税別)
キャンペーン価格
特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報
参考資料 カート
Takara Code
9504

TKR

タカラバイオ(株)
cDNA Library, Human Heart
クローニング関連、In-Fusion、cDNA Library
5 μg ¥161,000
¥80,500
2024/11/25~
2025/03/31

説明書・データシート・ベクター情報
9504
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製品説明

本製品は、各種polyA+ RNAからリンカープライマー法1)により作製したプラスミドDNA型cDNAライブラリーである。制限酵素 Not I 認識部位を有するoligo(dT)18リンカープライマーとBamH I(Bgl II)-Sma Iアダプターを用いて、unidirectional cloning している。クローニングの前にはサイズ分画を行い、約300 bp以下の断片をある程度除去している。ライブラリーは、プレート培養法により1度だけ増幅した菌体から、プラスミド抽出キットを使用して調製している。

クローニングベクター

cDNAライブラリーに使用しているベクター pAP3neo は、Okayama-Bergベクター(pCD2) をもとにして作製された2) もので、SV40プロモーターを有し、哺乳動物細胞で発現可能である。また、ssDNA生成に必要なf1 oriin vitro RNA合成のためのT7およびT3 RNAポリメラーゼプロモーターを含んでいる(図1)。
GenBank Accession No. AB003468

pAP3neoの構造

図1 pAP3neoの構造

クローニングサイト

1. Insert cDNAは、pAP3neoBgl II */ Not Iサイトにクローニングしている。
* Adaptor, BamH I(Bgl II)-Sma Iを用いてクローニングしているため、クローニング後のBgl IIサイトは潰れている。

2. Xba Iサイトは、dam methylaseの影響を受けている。

用途

新規あるいは既知のcDNAのPCRによるスクリーニング

製品内容

容量:5 μg
形状:10 mM Tris-HCl(pH8.0), 1 mM EDTA
濃度:200 μg/ml

ライブラリー作製法

ヒト各種臓器由来のpolyA+ RNAよりリンカープライマー法1)を利用して以下の手順で各cDNAライブラリーを作製している(図2)。
制限酵素Not I認識部位を有するoligo(dT)18リンカープライマーとBamH I(Bgl II)-Sma Iアダプターを用いてunidirectional cloningしているが、制限酵素Not I処理からcDNAを保護するため、逆転写酵素(RAV-2由来)による第一鎖cDNA合成時に5-methyl dCTPを取り込ませている。第二鎖cDNA合成、末端平滑化の後、アダプターを付加し、制限酵素Not Iで切断している。遊離のアダプターと短いcDNA断片は、クローニングの前のサイズ分画によりある程度除去している。サイズ分画されたcDNAはNot Iサイト側のみリン酸化されており、一方、ベクターは、制限酵素Not Iで切断した後、脱リン酸化処理を行い、制限酵素Bgl IIで切断しているので、ベクターはBgl IIサイトのみリン酸化されていることになる。
これにより、cDNAとベクターとのライゲーションの際に、複数のcDNAがベクターに挿入されたり、ベクター同士が連結する可能性を低減させている。cDNAとベクターを連結した後、XL1-Blue MRF′を宿主としてエレクトロポレーション法により形質転換を行うことによりcDNAライブラリーを作製している。作製したライブラリーは、液体培養法ではなく、プレート培養法により一度だけ増幅しているため、プライマリーライブラリーのポピュレーションがほぼ保たれている。
プラスミド型cDNAライブラリーは、一度だけ増幅した菌体からプラスミドDNAを抽出精製して調製している。
cDNAライブラリー作製法

図2 cDNAライブラリー作製法1)

mRNA Source/品質管理データ

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis(CoA)をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
注意事項
  • 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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