Capturem™ Protein A

Capturem Protein Aシリーズは、モノクローナル抗体やポリクローナル抗体の高品質・高純度精製、スクリーニングを小スケールで迅速に行えるスピンカラムタイプの製品である。次世代メンブレン技術であるCapturem技術とProtein Aの抗体結合能を組み合わせることにより、抗体のアフィニティ精製を簡便で迅速に行うことが可能である。
本製品は、高性能ナイロンメンブレンを装着したスピンカラムを用いており、サンプルの添加から溶出まで、室温で操作可能で、Miniprep（終売）では5分以内、Maxiprep（終売）、24 well plate（終売）では15分以内に終了する。処理時間が短いため、抗体の劣化や失活の懸念が少なく、待ち時間のない手軽な操作で質の高い精製が可能である。化学的修飾により孔の表面積を拡大したナイロンメンブレンは、ベッドボリュームが少なく、抗体の結合能が高く（≧75 mg/cm³）、高純度、高濃度での精製が可能である。




表1．様々な生物種由来抗体との結合能（Capturem ProteinA miniprep（終売））

抗体由来生物	結合能 (μg/column)*
Goat	100～150
Horse	＞150
Human	＞150
Mouse	100～150
Rabbit	50～100
Rat	＞150
Sheep	＞150

mouse IgGの場合の吸着量：40～60 μg／column

* 各生物の血清はリン酸binding buffer（pH8.0）に希釈し、本カラムへ添加した。

他社との比較1　－収量ー
他社製品より、高収量の抗体精製が可能！！
Capturem Protein A Miniprep（終売）とProtein A resinの比較
生物の血清からの抗体精製をCapturem Protein A Miniprepおよび他社のProtein A resinを用いた場合で比較した。
精製した抗体は、SDS-PAGEを行い、クマシーブルーで染色を行った（左図）。
精製抗体の収量は、280 nmの吸光度で測定した(右表）。Capturem Protein A Miniprepは他社Protein A resinを用いるよりも高収量の抗体精製が可能である。

他社製品との比較2　－純度－
他社製品より、高純度の抗体精製が可能！！

Capturem Protein A Miniprep（終売）は他社Protein A resinより高純度の抗体精製が可能
ヒト血清からの抗体精製を、Capturem Protein A Miniprepを使用した場合と他社Protein A resinを使用した場合で比較した。 Capturem Protein A（緑枠）は他社のProtein A resin（赤枠）と比較してヒト血清中アルブミンがより確実に除去されている。（Lane4のみウマ血清を用いている。）

1	Human Serum 1	7	A社 Elution 2
2	B社 Wash画分	8	B社 Elution 1
3	C社 Wash画分	9	B社 Elution 2
4	Capturem Elution （ウマ血清）	10	B社 Elution 2 （repeat）
5	Capturem Elution	11	C社 Elution 1
6	A社 Elution 1	12	C社 Elution 2

表2．Protein AとProtein Gのアイソタイプ親和性

Species	Antibody subtype	Protein A	Protein G	Protein A/G
Human	Total IgG IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA1 IgA2 Fab scFv	＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋	＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ － － － － ＋ －	＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋
Mouse	Total IgG IgM IgG1 IgG2a IgG2b IgG3	＋＋＋ － ＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋	＋＋＋ － ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋	＋＋＋ － ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
Rat	Total IgG IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c	＋ ＋ － － ＋＋＋	＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋＋	＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋＋
Rabbit	Total IgG	＋＋＋	＋＋＋	＋＋＋

＋＋＋ strong binding
＋＋ medium binding
＋ weak binding
－ no binding

室温で12ヵ月

本製品にはバッファー、コレクションチューブなどが含まれていません。下記組成のバッファーおよび製品をご用意ください。

1. Purification Buffer
   本製品は、抗体精製で一般的に使用されているリン酸、クエン酸、グリシン緩衝液などが使用可能である。標準的な溶液を以下に示す。
   ・Equilibration/Binding/Wash Buffer：10X Capturem Protein A Buffer（製品コード 635746）。使用前に1xに希釈する。
   　　下記のバッファー組成でも使用可能
   　　　－0.1 M Tris, 150 mM NaCl (pH8.0), 100 mM phosphate
   　　　－2 M NaCl (pH8.0), 100 mM sodium phosphate (pH6.8)
   　　　－2.5 M NaCl (pH7.4), 100 mM sodium citrate (pH7.4)
   　　　－Dulbecco's PBS
   ※Capturem Protein A Buffer（製品コード 635746）および上記4つのバッファーは、ヒトIgG抗体用に最適化されています。ヒト以外の生物種で実験を行う場合もCapturem Protein A Bufferの使用を推奨しますが、他の4つのバッファーでの条件検討もご検討ください。
   ・Elution Buffer：0.1 M glycine, pH2.5～3.0
   ・Neutralization Buffer：1 M Tris, pH8.5
2. Collection tube