心筋細胞 MiraCell® Cardiomyocytes v2 (from ChiPSC12) Kit

心毒性解析に
  • 心筋細胞の純度95％以上（cTnT陽性率）
  • 薬剤選択や代謝による純化工程無し
  • 自律拍動能を保持
  • 各種イオンチャネル遺伝子を発現（SCN5A、KCNQ1、CACNA1C、KCNH2等）
  • 各種イオンチャネル阻害剤（E4031、Chromanol 293B、Verapamil、Mexiletine）に対する電気生理学的応答性
製品コード メーカー
略称		 製品名 容量 価格（税別） 特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報		 参考資料 カート
Takara Code
Y50025

TKR

タカラバイオ（株）
 MiraCell® Cardiomyocytes v2 (from ChiPSC12) Kit
受注 ライセンス
1 Kit ヒトiPS細胞由来分化細胞の使用に関して
ご注文前にお問い合わせください。 		説明書・データシート・ベクター情報 個
Y50025
Y50023

TKR

タカラバイオ（株）
 MiraCell® CM Culture Medium v2
受注
100 ml ご注文前にお問い合わせください。 説明書・データシート・ベクター情報 個
Y50023
Y50015

TKR

タカラバイオ（株）
 MiraCell® Cardiomyocytes (from ChiPSC12) Kit
受注 ライセンス
1 Kit ヒトiPS細胞由来分化細胞の使用に関して
ご注文前にお問い合わせください。 		説明書・データシート・ベクター情報 個
Y50015
Y50013

TKR

タカラバイオ（株）
 MiraCell® CM Culture Medium
受注
100 ml ご注文前にお問い合わせください。 説明書・データシート・ベクター情報 個
Y50013
Y50012

TKR

タカラバイオ（株）
 MiraCell® CM Thawing Medium
20 ml 単品販売不可 説明書・データシート・ベクター情報 個
Y50012
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製品説明

MiraCell Cardiomyocytes v2 (from ChiPSC12) は、ヒトiPS細胞から誘導した高純度心筋細胞であり、心筋細胞の性状・機能解析などに使用可能である。また、心筋細胞の生理機能の解析だけでなく、MEA（Multi-electrode array）システム等を用いた種々の薬剤による心毒性試験などに対しても幅広く使用することができる。
本製品は、京都大学iPS細胞研究所によって研究開発されたヒト心筋細胞の作製技術を、タカラバイオがiHeart Japan 株式会社から導入し共同開発された製品である。本心筋細胞作製技術では、心筋特異的プロモーター（α-MHC等）を用いた薬剤（ピューロマイシン等）による純化を一切行うことなく高純度の心筋細胞を調製するため、長期間の培養に伴って通常生じる純度の低下が起きにくく、90日間の培養期間経過後においても純度の低下が認められないことが報告されている（論文投稿中）。
なお、本製品の製造に使用しているヒトiPS細胞株は、Cellartis DEF-CS 500 Culture System（製品コード Y30010）を用いてフィーダーフリー下で培養されたChiPSC12（製品コード Y00285）を用いている。
本製品には細胞とヒトES/iPS細胞由来心筋細胞融解用培地（MiraCell CM Thawing Medium）、心筋細胞培養用培地（MiraCell CM Culture Medium v2）が含まれている。
※ MiraCell Cardiomyocytes v2 (from ChiPSC12) Kit（製品コード Y50025）は、従来製品（MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) Kit（製品コード Y50015））の基本性状（心筋純度、生存率、プレーティング効率、E-4031応答性、等）をそのままに、心毒性試験などで用いられているFridericiaの補正式によるFPD（Field potential duration）の補正条件として必要な一定数以上の拍動数が得られるよう改良されています。

製品コード Y50025の特徴やMEA (Micro-Electrode Array) システムによる性能評価データはこちら
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TEL：077-565-6999

内容

MiraCell Cardiomyocytes v2 (from ChiPSC12) Kit（製品コード Y50025）
  • MiraCell Cardiomyocytes v2 (from ChiPSC12)（凍結品：1 vial ＞3×106 viable cells）
  • MiraCell CM Thawing Medium （20 ml）（※単品購入不可：製品コード Y50012）
  • MiraCell CM Culture Medium v2 （100 ml）（※単品購入も可能：製品コード Y50023）

MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) Kit（製品コード Y50015）
  • MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12)（凍結品：1 vial ＞3×106 viable cells）
  • MiraCell CM Thawing Medium（20 ml）（※単品購入不可：製品コード Y50012）
  • MiraCell CM Culture Medium（100 ml）（※単品購入も可能：製品コード Y50013）

保存

MiraCell Cardiomyocytes v2 (from ChiPSC12) Kit（製品コード Y50025）
  • MiraCell Cardiomyocytes v2 (from ChiPSC12)：液体窒素保存
    到着後、ただちに液体窒素タンクにて保存してください。
    液体窒素保存ができない場合は、ただちに細胞を融解し、培養を行ってください。
  • MiraCell CM Thawing Medium、MiraCell CM Culture Medium v2：－20℃以下、融解後4℃
    使用するまで－20℃以下で凍結保存し、使用前に4℃で一晩かけて培地の解凍を行ってください。
    また、解凍後は4℃で保存し、MiraCell CM Thawing Medium は1週間以内、MiraCell CM Culture Medium v2については1ヵ月以内を目安に使用してください（再凍結・融解は不可）。

MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) Kit（製品コード Y50015）
  • MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12)：液体窒素保存
    到着後、ただちに液体窒素タンクにて保存してください。
    液体窒素保存ができない場合は、ただちに細胞を融解し、培養を行ってください。
  • MiraCell CM Thawing Medium、MiraCell CM Culture Medium：－20℃以下、融解後4℃
    使用するまで－20℃以下で凍結保存し、使用前に4℃で一晩かけて培地の解凍を行ってください。
    また、融解後は4℃で保存し、MiraCell CM Thawing Medium は1週間以内、MiraCell CM Culture Medium については1ヵ月以内を目安に使用してください（再凍結・融解は不可）。

キット以外に必要な試薬

・Dulbecco’s PBS（製品コード C-40230）
・Dulbecco's PBS, w/o Ca＋＋/ Mg＋＋（製品コード C-40232）
・1 mg/ml フィブロネクチン溶液
・0.25％トリプシン-EDTA溶液

動画（操作手順）

MiraCell Cardiomyocytesの剥離操作

使用上の注意

MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) KitはiHeart Japan株式会社よりライセンスを受け、タカラバイオ（株）が製造、販売しています。

アプリケーションデータ

※ 下記のデータは、従来製品（MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) Kit ； 製品コード Y50015）のものです。
MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) のロット間差（3ロット）の確認
図1. MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) のロット間差（3ロット）の確認

  • 心筋マーカーcTnT（Cardiac TroponinT）陽性率（解凍2日目）比較結果
  • 解凍直後及び解凍2日目の生細胞数比較結果
  • MEDプローブ上（アルファメッドサイエンティフィック社製）でのFPDcF(Field potential duration corrected by Fridericia's formula)の比較結果。※BPM35以上のプローブを使用
  • 各ロットにおけるIKr阻害剤（E-4031）によるFPDc10（FPDcFが10％延長する際の薬剤濃度）比較結果
    いずれの評価方法においても、ロット間差は少ないことが確認された。

MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) を用いた薬剤応答性試験
図2. MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) を用いた薬剤応答性試験

解凍後の心筋細胞をMEDプローブ（アルファメッドサイエンティフィック社製）に播種後、4～9日目にBPM（Beats per Minute）が 35以上を示すプローブについて、細胞外電位測定装置（同社製）を用いて薬剤応答性を確認した。IKr阻害剤（E-4031）、IKs阻害剤（Chromanol 293B）、Naチャネル及びIKr阻害剤（Mexiletine）についてはFPDcFの延長、Caチャネル阻害剤であるVerapamilについてはFPDcFの短縮が確認された。また、E-4031及びMexiletineに関しては、高濃度の場合において不整脈様の波形（EAD/TA；Early after depolarization/Triggered activity）が観察された。

MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) の心筋関連タンパク質の発現解析
図3. MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) の心筋関連タンパク質の発現解析

フィブロネクチンコートした培養用プレートへ継代した解凍後の心筋細胞を、4％パラホルムアルデヒドで固定し、各タンパク質に特異的な抗体を用いて染色した。その結果、ほぼすべての細胞で心筋マーカータンパク質cTnTの発現が確認できており、純度の高い心筋細胞であることが確認された（左図）。また、MLC2AとMLC2Vの染色像から、MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) は、ほとんどの細胞で心室筋細胞マーカーであるMLC2Vが発現していることが確認された（中図）。また、α-actininの染色により、特徴的なサルコメア構造が確認された（右図）。さらに、各種イオンチャネル遺伝子の発現（SCN5A、KCNQ1、CACNA1C、KCNH2など）についても確認できた（詳細データ非開示）。

ヒトiPS細胞由来細胞の使用に関して

本製品は、ヒトiPS細胞由来の分化細胞です。添付の文書をご確認のうえ、お取扱いにはご注意ください。
ヒトiPS細胞由来分化細胞の使用について

Technical Notes

MED64装置を用いた毒性評価試験プロトコール
MED64装置を用いた毒性評価試験プロトコール（凍結バイアルからのMEDプローブ直接播種）

使用文献・参考文献

関連製品・受託

ヒト心筋細胞（Human Cardiac Myocytes：HCM）

注意事項
  • 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
  • タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
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