試料からの核酸精製が不要！
- 特定家畜伝染病防疫指針（令和3年10月1日改正）＊の診断マニュアルに記載されたリアルタイムPCR法にも使用可能
＊「豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針 令和2年7月1日農林水産大臣公表 （一部変更：令和3年10月1日）」および「アフリカ豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針 令和2年7月1日農林水産大臣公表 （一部変更：令和3年10月1日）」 - 核酸精製は不要！Lysis Bufferと試料を混ぜて室温で5分間静置するだけ
- CSFV・ASFV遺伝子、インターナルコントロールを1チューブで同時検出！
- 血清試料、臓器乳剤試料からの検出に対応
- PCR増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性を防止
製品説明
豚熱（Classical swine fever, CSF）およびアフリカ豚熱（African swine fever, ASF）は、それぞれCSFウイルス（以下CSFV）およびASFウイルス（以下ASFV）が豚やイノシシに感染することで引き起こされる疾病である。
本製品は、リアルタイムRT-PCR法によりCSFV遺伝子・ASFV遺伝子およびインターナルコントロールとしてサンプル由来のswine GAPDH遺伝子を同時に検出するためのプライマー、プローブ、RT-PCR酵素からなる試薬（研究用試薬）である。
なお、「豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針 令和2年7月1日農林水産大臣公表 （一部変更：令和3年10月1日）」の「【参考】（別紙1）豚熱の診断マニュアル」、および「アフリカ豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針 令和2年7月1日農林水産大臣公表 （一部変更：令和3年10月1日）」の「【参考】（別紙1）アフリカ豚熱の診断マニュアル」では、リアルタイムPCRの実施に市販キットが利用できるとされており、本試薬はそのリアルタイムPCR検査にも使用できる。
※本製品には、農林水産省委託研究事業「安全な農畜水産物安定供給のための包括的レギュラトリーサイエンス研究推進委託事業」のうち課題解決型プロジェクト研究 「官民・国際連携によるASF ワクチン開発の加速化」における国立研究開発法人農研機構との共同研究の成果が活用されています。
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe (with ROX Reference Dye)（製品コード RC212A）
本製品は、リアルタイムRT-PCR法によりCSFV遺伝子・ASFV遺伝子およびインターナルコントロールとしてサンプル由来のswine GAPDH遺伝子を同時に検出するためのプライマー、プローブ、RT-PCR酵素からなる試薬（研究用試薬）である。
なお、「豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針 令和2年7月1日農林水産大臣公表 （一部変更：令和3年10月1日）」の「【参考】（別紙1）豚熱の診断マニュアル」、および「アフリカ豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針 令和2年7月1日農林水産大臣公表 （一部変更：令和3年10月1日）」の「【参考】（別紙1）アフリカ豚熱の診断マニュアル」では、リアルタイムPCRの実施に市販キットが利用できるとされており、本試薬はそのリアルタイムPCR検査にも使用できる。
※本製品には、農林水産省委託研究事業「安全な農畜水産物安定供給のための包括的レギュラトリーサイエンス研究推進委託事業」のうち課題解決型プロジェクト研究 「官民・国際連携によるASF ワクチン開発の加速化」における国立研究開発法人農研機構との共同研究の成果が活用されています。
【検出対象遺伝子】
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe（製品コード RC211A）| 検出対象遺伝子 | プローブ標識 |
| CSFV遺伝子 | Cyanine5 （レポーター）／ダーククエンチャー |
| ASFV遺伝子 | ROX（レポーター）／ダーククエンチャー |
| インターナルコントロール（IC） | FAM（レポーター）／ダーククエンチャー |
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe (with ROX Reference Dye)（製品コード RC212A）
| 検出対象遺伝子 | プローブ標識 |
| CSFV遺伝子 | Cyanine5 （レポーター）／ダーククエンチャー |
| ASFV遺伝子 | FAM（レポーター）／ダーククエンチャー |
| インターナルコントロール（IC） | HEX（レポーター）／ダーククエンチャー |
| （Reference Dye） | （ROX） |
内容
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe（製品コード RC211A）
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe (with ROX Reference Dye)（製品コード RC212A）
＜注＞ Lot. AM11211Aよりコンポーネントを変更し、ROX Reference Dyeを除きました。
CSFV/ASFV Positive Control DNA（製品コード RC215A）
Lysis Buffer S（製品コード 9811）
＊1 反応に必要な酵素、基質等を含む。
＊2 遮光に留意すること。
左から、製品コードRC211A、RC212A、RC215A、9811
| RT-qPCR Mix＊1 | 2× | 625 µl×2 |
| Primer/Probe Mix (CSF/ASF) 2＊2 | 10× | 250 µl |
| Primer/Probe Mix (GAPDH) 2＊2 | 10× | 250 µl |
 RNase Free H2O | 1.0 ml | |
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe (with ROX Reference Dye)（製品コード RC212A）
| RT-qPCR Mix＊1 | 2× | 625 µl×2 |
| Primer/Probe Mix (CSF/ASF) 1＊2 | 10× | 250 µl |
| Primer/Probe Mix (GAPDH) 1＊2 | 10× | 250 µl |
| RNase Free H2O | 1.0 ml | |
| ROX Reference Dye II＊2 | 50× | 50 µl |
CSFV/ASFV Positive Control DNA（製品コード RC215A）
| EASY Dilution (for Real Time PCR) | 1.0 ml×4 | |
| Positive Control DNA (CSF/ASF) | 1×106 copies/µl | 25 µl |
| Positive Control DNA (GAPDH) | 1×106 copies/µl | 25 µl |
Lysis Buffer S（製品コード 9811）
| Lysis Buffer S | 2× | 500 µl |
＊1 反応に必要な酵素、基質等を含む。
＊2 遮光に留意すること。
左から、製品コードRC211A、RC212A、RC215A、9811
保存
－20℃
キット以外に必要な器具、機器（主なもの）
- 【 器具 】
-
- マイクロピペット
- マイクロピペット用チップ（疎水性フィルター付のもの）
- リアルタイムPCR用のチューブ 等
- 【 機器 】リアルタイムPCR装置
-
- CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe（製品コード RC211A）の場合
Thermal Cycler Dice Real Time System III (Cy5) with PC（製品コード TP990）
Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900/TP960：終売）
※TP900/TP960は、Cy5オプションフィルターの追加が必要です。CFX96 Real-Time PCR Detection System（Bio-Rad社）
Filter Unit (Cy5) for Thermal Cycler Dice Real Time System（製品コード TP803：お問合せください）
LightCycler 96 System（Roche Diagnostics社） - CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe (with ROX Reference Dye)（製品コード RC212A）の場合
QuantStudio 5 Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
LightCycler 480 System II (Roche Diagnostics社)
- CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe（製品コード RC211A）の場合
補足資料
【Quick Manual】
Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズを使用の場合に便利な“Quick Manual”をご用意しています。
キットに添付の取扱説明書とあわせてご使用ください。
【核酸精製について】
溶血が強い試料や濁りが認められる試料については、核酸精製を実施することで結果が改善する場合があります。
核酸の精製には、以下の製品がご利用いただけます。
操作方法の詳細は、以下をご確認ください。
血清・臓器乳剤からの核酸精製プロトコール
Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズを使用の場合に便利な“Quick Manual”をご用意しています。
キットに添付の取扱説明書とあわせてご使用ください。
- Thermal Cycler Dice Real Time System III (Cy5) with PC（製品コード TP990）
- Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900/TP960：終売）
【核酸精製について】
溶血が強い試料や濁りが認められる試料については、核酸精製を実施することで結果が改善する場合があります。
核酸の精製には、以下の製品がご利用いただけます。
- 血清からの核酸精製
NucleoSpin Virus （製品コード 740983.10/.50/.250） - 臓器乳剤からの核酸精製
NucleoSpin RNA（製品コード 740955.10/.50/.250）
※注意：NucleoSpin RNAの標準プロトコールにある「DNase処理」工程は実施しないでください。
ASFVはDNAウイルスです。「DNase処理」を行うとASFVのゲノムDNAも分解されるため、本試薬で検出されなくなります。
操作方法の詳細は、以下をご確認ください。
血清・臓器乳剤からの核酸精製プロトコール
Protocols
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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