NucleoSnap^® cfDNA

NucleoSnap cfDNAは、ヒトのEDTA血漿などより循環セルフリーDNAの回収を行うキットである。新規設計されたSnap-offデザインのNucleoSnap cfDNA Columnを用いることで最大10 mlの血漿^＊から50～1,000 bpのフラグメント化された循環DNAの精製を効率よく行うことができる。また、非常に少容量（20～100μl）で溶出できるので、高濃度の循環DNAを得ることができる。

原理	シリカメンブレン法
形状	NucleoSnapカラム
サンプル	ヒトEDTA血漿または Cell-Free DNA BCTに採取された血漿
サンプル量	1～5 ml＊
回収サイズ	≧50 bp
回収量	血漿 1 mlあたり0.1～100 ng（サンプルによって異なる）
溶出液量	20～100 μl
精製時間	45分

* 5 mlを超える血漿サンプルからDNAを精製する場合には、追加のBuffer VL（製品コード 740833.200）およびLiquid Proteinase K（製品コード 740396）が必要である。

NucleoVac 24 Vacuum Manifoldはシリカカラム（NucleoSnapカラム, NucleoSpinカラムなど）を用いて吸引法で核酸精製を行う際に使用する装置である。同時に24個のシリカカラムをVacuum Manifoldの上部のスロットに装着し、結合、洗浄、ステップを吸引法で簡便、迅速に行うことができる。
マニホールドベースとNucleoVac Mini Adapter、ルアープラグ、チューブ接続用コネクタなどで構成されている。

・Column Conditioner CC
・Lysis Buffer VL
・Wash Buffer VW1
・Wash Buffer WB
・Elution Buffer^＊
・Liquid Proteinase K
・NucleoSnap cfDNA Columns
・Collection Tubes (2 ml)
・Collection Tubes (1.5 ml)
・NucleoVac Mini Adapter

室温（Liquid Proteinase K：開封後は4℃または－20℃保存）

図1. 5 mlのヒトEDTA血漿からのセルフリーDNA回収
NucleoSnap cfDNAおよび吸引法による他社キットを用いて、5 mlのEDTA血漿からcfDNAを回収した。DNAの収量はQuantifiler Human DNA Quantification Kit（ThermoFisher Scientific）およびApplied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems（ThermoFisher Scientific）を用いてqPCRにより測定した。
NucleoSnap cfDNAを使用することで、より大きな収量が得られた。
（マッハライ・ナーゲル社取得データ）
図2. Cell-Free DNA BCTからのセルフリーDNAの回収
Cell-Free DNA BCT（Streck）を用いて保存した3種類のサンプルから、NucleoSnap cfDNA（MN）および吸引法による他社キット（Q）を用いてセルフリーDNAを回収した。回収したセルフリーDNAは、High Sensitivity DNA Kit（Agilent）を用いてバイオアナライザー2100で解析した。セルフリーDNAは約170 bpにピークが見られ、NucleoSnap cfDNAを用いた時、より多くのセルフリーDNAが回収できることがわかった。
（マッハライ・ナーゲル社取得データ）

NucleoSnapはマッハライ・ナーゲル社の、Cell-Free DNA BCTはStreck社の登録商標です。