NucleoSpin^® cfDNA Midi

NucleoSpin cfDNA Midiは、5 mlまでの血漿サンプルから吸引ろ過法により迅速に高純度のセルフリーDNAを精製するためのキットである。吸引ろ過法の採用により、カラムを遠心操作する必要がない。また、NucleoVac 96 Vacuum Manifold と Starter Set Midiを使用して24サンプルまでを同時に処理可能である。
Starter Set Midiは、NucleoVac 96 Vacuum Manifoldや自動分注装置に対応したカラムホルダーを含み、Column Holder Midi、Wash Plate Midi、Elution Tube Holder Midiよりなる。

原理	シリカメンブレン法
形状	Midiスピンカラム
サンプル量	1～5 ml 血漿（EDTA入り採血管、Cell-Free DNA BCT採血管（Streck社）由来）
回収サイズ	≧50 bp
回収量	サンプル品質および量に依存
溶出液量	200 μl (最終溶出量：140 μl)
精製時間	90分

図1．2 ml ヒトEDTA血由来血漿からのセルフリーDNA精製
3人のEDTA血液より得られた各血漿から、NucleoSpin cfDNA Midiまたは他社同等品を使用してセルフリーDNAを精製した。回収DNA量はqPCR法により測定した。
NucleoSpin cfDNA Midiを使用した場合、他社同等品より、収量よくセルフリーDNAが精製できた。

図2．Cell-free DNA BCT採血管の保存血液から得られた血漿からのセルフリーDNA精製
Cell-free DNA BCT採血管（Streck社）またはEDTA入り採血管で保存された5検体の血液から血漿を調製し、これらの血漿から、NucleoSpin cfDNA Midiを用いてセルフリーDNAを精製した。精製したDNA量はqPCR法により測定した。
Cell-free DNA BCT採血管で保存された血液からもセルフリーDNAが問題なく精製できることが分かった。

NucleoSpin cfDNA Midi
・Activation Buffer PMA
・Lysis Buffer PML
・Binding Buffer PMB
・Wash Buffer PMW1
・Wash Buffer PMW2 (Concentrate)
・Elution Buffer PME^＊1
・Liquid Proteinase K
・NucleoSpin cfDNA Midi Columns
・Collection Tubes (1.5 ml)
・24-Square-well Block

NucleoSpin cfDNA Midi Core Kit
・Activation Buffer PMA
・Lysis Buffer PML
・Binding Buffer PMB
・Wash Buffer PMW1
・Wash Buffer PMW2 (Concentrate)
・Elution Buffer PME^＊1
・Liquid Proteinase K
・NucleoSpin cfDNA Midi Columns
・Collection Tubes (1.5 ml)

Starter Set Midi
・Column Holder Midi
・Wash Plate Midi
・Elution Tube Holder Midi
・Dummy Columns

*1 組成：5 mM Tris-HCl, pH8.5

室温 （Liquid Proteinase K：開封後は4℃または－20℃保存）

試薬
・96～100％エタノール

器具
• NucleoVac 96 Vacuum Manifold（製品コード 740681）
• NucleoVac Vacuum Regulator（製品コード 740641）
• Starter Set Midi（製品コード 740744）
• 吸引ポンプ

NucleoSpinはマッハライ・ナーゲル社の、Cell-Free DNA BCTはStreck社の登録商標です。