16S (V3-V4) Metagenomic Library Construction Kit for NGS

次世代シーケンサーによる糞便・環境サンプルの細菌叢解析
製品コード メーカー
略称
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報
参考資料 カート
Takara Code
R161A

TKR

タカラバイオ(株)
16S (V3-V4) Metagenomic Library Construction Kit for NGS
50回 ¥112,000
説明書・データシート・ベクター情報
R161A
R161B(A×2)

TKR

タカラバイオ(株)
16S (V3-V4) Metagenomic Library Construction Kit for NGS
100回 ¥208,000
説明書・データシート・ベクター情報
R161B(A×2)
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製品説明

本製品は、イルミナ社MiSeqで16S rRNA細菌叢解析を行うためのPCR増幅キットである。細菌16S rRNA遺伝子のV3-V4領域を対象とし、PCR酵素に、多様な配列を効率よく増幅可能なTks Gflex DNA Polymeraseを採用している。
V3-V4領域の増幅には使用実績の高い341F、806Rプライマーを採用しており(参考文献1、2、図1)、プライマーの5’側には、Illumina MiSeq用のoverhang配列が付加されている。本製品で増幅したPCR産物に、Nextera XT Index Kit(イルミナ社)のプライマーでシーケンスアダプターと検体ごとのシーケンスデータを識別するためのIndex配列を付加することにより、MiSeq用のライブラリーを調製する(図2)。

【注意】ライブラリー作製には本キットの他に以下の製品もご用意ください。

  • Nextera XT Index Kit(イルミナ社)
  • Agencourt AMPure XP(Beckman Coulter社)

16S rRNAの可変領域と本製品のPCR増幅領域
図1.16S rRNAの可変領域と本製品のPCR増幅領域

ライブラリー作製のフロー
図2.ライブラリー作製のフロー

内容

(50回)
1.2×Gflex PCR Buffer (Mg2+, dNTP plus)
1.25 ml
2.Tks Gflex DNA Polymerase(1.25 units/μl)
62.5 U(50 μl)
3.16S V3-V4 Primer Mix(10×)
125 μl
4.H2O
1 ml

キット以外に必要な試薬、機器など(主なもの)

・核酸抽出キット
[糞便試料の場合]
NucleoSpin DNA Stool(製品コード 740472.10/.50)など
[土壌試料の場合]
NucleoSpin Soil(製品コード 740780.10/.50/.250)など
PCR産物の精製
Agencourt AMPure XP(Beckman Coulter社 Code. A63880/A63881/A63882)
0.2 ml 磁気スタンド:Magnetic Separator-PCR Strip(製品コード 635011)など
80% エタノール
溶出液(10 mM Tris-HCl, pH8.5)
・シーケンスアダプターとIndex配列の付加
Nextera XT Index Kit(イルミナ社 Code. FC-131-1001/FC-131-1002)
Nextera XT Index Kit v2 set A-D(イルミナ社 Code. FC-131-2001~2004)
・サーマルサイクラー
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Touch(製品コード TP350)
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient(製品コード TP600)など
・アガロース電気泳動装置
Mupid-2plus(製品コード M-2P)
Mupid-exU(製品コード EXU-1)など
・アガロースゲル
Agarose L03「TAKARA」(製品コード 5003/5003B)
PrimeGel Agarose PCR-Sieve(製品コード 5810A)など
・微量高速遠心機
・マイクロピペットおよびチップ

保存

-20℃
注意事項
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