TB Green^® Advantage^® qPCRプレミックス

TB Green Advantage qPCR Premixは、便利な2× 濃度のマスタープレミックスで、インターカレーター法によるqPCR（定量PCR、リアルタイムPCR）用に特別に調製されている。本試薬には、全長Taq DNAポリメラーゼ、ホットスタート用抗体、TB Green、dNTPs、および最適化したバッファーが含まれ、リアルタイムPCRでの非常に高い感度と増幅効率を実現し、高速リアルタイムPCRでも高い性能を示す。本試薬を用いることで、高感度かつ広いダイナミックレンジで正確な定量が可能になる。TB Green Advantage qPCR Premixには、ROX Reference Dye LSRとROX Reference Dye LMPが添付されており、装置に合わせて適切なROXを用いることで蛍光シグナルの補正が可能である。

TB Green Advantage qPCR Premixは、A社製のリアルタイム試薬に比べ、高い反応特異性を示す。図1の実験では、Clontechの試薬がシングルピークの融解曲線を示したのに比べ、A社の試薬では融解曲線分析で複数のピークが見られ、特に鋳型のコピー数が少ない場合に非特異的増幅が顕著であった（図1）（1）。また、図2に示すCt値のシフトからわかるように、TB Green Advantage qPCR PremixはB社の試薬より高い増幅効率を示す。
TB Green Advantage qPCR Premixはその他の競合製品と比べた場合にも、反応特異性（融解曲線から目的産物のみの特異的増幅を確認）、増幅効率、感度（増幅曲線がより低いCt値を示す）の面でより優れた性能を発揮する。

図1. Roche LightCyclerを用いて、TB Green Advantage qPCR PremixとA社同タイプキットの反応特異性を比較
TB Green Advantage qPCR Premixでの結果をパネルA（増幅曲線）とパネルC（融解曲線）に、A社試薬での結果をパネルB（増幅曲線）とパネルD（融解曲線）に示した。
サイクリング条件は以下の通りである。
TB Green Advantage qPCR Premix： 95℃ 10秒→95℃ 5秒／60℃ 20秒；45サイクル。A社試薬：95℃ 10分→94℃ 10秒／55℃ 5秒／72℃ 10秒；45サイクル

図2. ABI PRISM 7000 Sequence Detection Systemを用いて、TB Green Advantage qPCR PremixとB社同タイプキットの増幅効率を比較
TB Green Advantage qPCR Premixでの結果をパネルA（増幅曲線）に、B社試薬での結果をパネルB（増幅曲線）に示した。
サイクリング条件は以下の通りである。
TB Green Advantage qPCR Premix： 95℃ 10秒→95℃ 5秒／60℃ 31秒；40サイクル。B社試薬：95℃ 10分→95℃ 15秒／60℃ 1分；45サイクル

2×TB Green Advantage qPCR Premix
50×ROX Reference Dye LSR^＊
50×ROX Reference Dye LMP^＊

＊ウェル間の蛍光シグナルの補正を行う装置で解析する場合に使用します。

• ROX Reference Dye LSRを添加する機種
  光源がレーザーの機種 　：Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System　（Thermo Fisher Scientific社） など
  （注意）StepOne/ StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）はLED光源ですが、ROX Reference Dye LSRをご使用ください。
• ROX Reference Dye LMPを添加する機種
  光源がLamp またはLEDの機種　：Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社） など

－70℃ （遮光保存）
融解後は、4℃で遮光保存