Advantage^® 2 ポリメラーゼミックス & PCR キット

Advantage 2 Polymerase Mixは、鋳型のサイズが大きい場合や、より高い正確性と性能のPCRが必要な実験での使用に適している。Advantage 2は、野生型のTaqポリメラーゼよりも正確性が3倍高く、非常に用途が広いポリメラーゼミックスで、cDNAをはじめさまざまな鋳型DNAを簡単に増幅できる（図1）。
Advantage 2 Polymerase Mixには、以下の成分が含まれている。

・	Titanium Taq DNA Polymerase Taqよりも高い収量と感度を有し、TaqStart Antibodyを使用するホットスタートPCRを実現。 反応液の室温調製が可能で、反応特異性も向上する。（1、2）

・	校正用ポリメラーゼ PCRによる増幅サイズの改善（図2）と正確性の向上（3）を目的として、少量の校正用ポリメラーゼが含まれている。

Advantage 2 Polymerase Mixは、SMARTer RACE cDNA Amplifcation Kit、SMARTer Pico PCR cDNA Synthesis Kit、Clontech PCR-Select Subtraction KitなどPCRを利用するClontechの各種キットとの併用にも適している。

図1. Advantage 2 Polymerase Mixおよび他社Taqポリメラーゼによる腫瘍壊死因子受容体II（TNFR II）cDNAの増幅
各ポリメラーゼで得られたPCR産物5 μlを用いて、1.1 ％アガロース／EtBrゲルで電気泳動を行った。Advanatge 2を用いた場合にのみ0.4 kb TNFR II断片の増幅が認められた。
レーン1：Advantage 2　レーン2：他社Taqポリメラーゼ　レーンM：DNAサイズマーカー

図2. Advantage 2 Polymerase Mixによるサイズの大きい各種鋳型からの増幅
以下に示す条件で得られたPCR産物1～3 μlを用いて、1.1％アガロース／EtBrゲルで電気泳動を行った。
レーン1：2.5 kbのE.coli DNAポリメラーゼ遺伝子をゲノムDNAから増幅
レーン2：3.5 kbのウシ膵臓トリプシンインヒビター遺伝子を仔ウシ胸腺のゲノムDNAから増幅
レーン3：5.9 kbのヒトIL-1β遺伝子をヒトゲノムDNAから増幅
レーン4：8.5 kbのヒトティチンcDNAをヒト骨格筋SMART cDNAライブラリーから増幅
レーン5：18.5 kbのλインサートをλクローンから増幅
レーンM：λ-Hind III DNAサイズマーカー

・cDNA増幅
・ライブラリー構築

Advantage 2 Polymerase Mixを用いて増幅したPCR産物のほとんどは、3’末端にAが1塩基付加されている。したがって、そのPCR産物をそのままT-Vector［pMD20（製品コード 3270）、pMD19 (Simple)（製品コード 3271）など］にクローニングすることができる。また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。

Advantage 2 Polymerase Mixには10× Advantage 2 PCR Buffer、10× Advantage 2 SA PCR Bufferを添付。
キットにはAdvantage 2 Polymerase Mix、10× Advantage 2 PCR Buffer、10× Advantage 2 SA PCR Buffer、dNTP Mix、コントロール用鋳型とプライマー、PCR-grade H₂Oが含まれる。
Advantage 2 SA PCR Bufferは～2 kbの増幅に最適。

－20℃