- 個々の細胞または細胞集団全体でリアルタイムにプロテアソーム活性をモニター
- 簡便で非侵襲的な検出法
- プロテアソーム阻害剤のマルチウェルスクリーニングアッセイも可能
製品説明
真核細胞でプロテアソーム活性を研究する際には、Proteasome Sensor Vectorをご利用ください。このレポーターベクターは、プロテアソーム感受性蛍光タンパク質ZsProSensor-1を発現するように設計されている（図1）。これはマウスのオルニチンデカルボキシラーゼ分解ドメイン（MODCの410～461アミノ酸、MODC d410）をZsGreenのC末端に融合したタンパク質である。MODC分解ドメインの付加により、ZsProSensor-1はプロテアソームで速やかに分解される。
図1. プロテアソームセンサーベクター（pZsProSensor-1）
プロテアソームが細胞内で正常に機能すると、ZsProSensor-1の蓄積は起こらず緑色蛍光は増大しない。実際に、ZsProSensor-1はリボソームで翻訳された直後にプロテアソームの標的となるため、ほとんどの蛍光団は変化して折り畳まれる前に分解される。しかし、プロテアソームが阻害されるとZsProSensor-1は直ちに蓄積する。緑色蛍光の増大はプロテアソーム活性の低下を示すものであり、FITCフィルターセットを用いて蛍光顕微鏡法、フローサイトメトリーまたは96穴プレートリーダーで測定することができる（図2）。
図2. 生細胞中のプロテアソーム活性
Proteasome Sensor Vectorをトランスフェクトした安定HEK 293細胞をG418で選択し、FACSで選別した後、10 μMのALLNで6時間処理した。ALLNはプロテアソームのキモトリプシン活性を可逆的に阻害するペプチドアルデヒド（Ac-Leu-Leu-Nle-al）であり、プロテアソームによるZsProSensor-1タンパク質の分解を抑制する。上記のALLN処理の結果、速やかにZsProSensor-1タンパク質が蓄積し、蛍光顕微鏡法（パネルA）、フローサイトメトリー（パネルB）または96穴プレートリーダーを用いた蛍光測定法（パネルC）で測定可能な強い緑色蛍光シグナルが認められた。
図1. プロテアソームセンサーベクター（pZsProSensor-1）
プロテアソームが細胞内で正常に機能すると、ZsProSensor-1の蓄積は起こらず緑色蛍光は増大しない。実際に、ZsProSensor-1はリボソームで翻訳された直後にプロテアソームの標的となるため、ほとんどの蛍光団は変化して折り畳まれる前に分解される。しかし、プロテアソームが阻害されるとZsProSensor-1は直ちに蓄積する。緑色蛍光の増大はプロテアソーム活性の低下を示すものであり、FITCフィルターセットを用いて蛍光顕微鏡法、フローサイトメトリーまたは96穴プレートリーダーで測定することができる（図2）。
図2. 生細胞中のプロテアソーム活性
Proteasome Sensor Vectorをトランスフェクトした安定HEK 293細胞をG418で選択し、FACSで選別した後、10 μMのALLNで6時間処理した。ALLNはプロテアソームのキモトリプシン活性を可逆的に阻害するペプチドアルデヒド（Ac-Leu-Leu-Nle-al）であり、プロテアソームによるZsProSensor-1タンパク質の分解を抑制する。上記のALLN処理の結果、速やかにZsProSensor-1タンパク質が蓄積し、蛍光顕微鏡法（パネルA）、フローサイトメトリー（パネルB）または96穴プレートリーダーを用いた蛍光測定法（パネルC）で測定可能な強い緑色蛍光シグナルが認められた。
保存
#632425：－20℃
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
- タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
- タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。
また、他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。 - ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
