製品説明
Brevibacillus（ブレビバチルス、Bacillus brevis）発現システムは高効率でのタンパク質生産能に優れたシステムである。本菌はグラム陽性の細菌で、特にタンパク質を大量に分泌生産する特長を有している1）。この特長を生かし、これまでに多数の異種タンパク質分泌生産に成功してきた。
しかし、最近の研究により、分泌生産だけではなく菌体内生産においても本菌は優れた性質を示すことが分った。大腸菌では不溶化して沈殿するタンパク質も、本菌で生産させると可溶性の状態で回収することも可能である。
pNI DNA、pNI-His DNAはブレビバチルス内で強力に働くP2プロモーターを用いた菌体内発現ベクターである。本来細胞内に作られ機能するタンパク質で、大腸菌では生産物が不溶化してしまい、in vitro リフォールディングも困難である場合にも、pNI DNA、pNI-His DNAが有効である。
本システムは以下に示すような特長がある。
しかし、最近の研究により、分泌生産だけではなく菌体内生産においても本菌は優れた性質を示すことが分った。大腸菌では不溶化して沈殿するタンパク質も、本菌で生産させると可溶性の状態で回収することも可能である。
pNI DNA、pNI-His DNAはブレビバチルス内で強力に働くP2プロモーターを用いた菌体内発現ベクターである。本来細胞内に作られ機能するタンパク質で、大腸菌では生産物が不溶化してしまい、in vitro リフォールディングも困難である場合にも、pNI DNA、pNI-His DNAが有効である。
本システムは以下に示すような特長がある。
- 可溶性の形で異種タンパク質を効率良く菌体内に生産する
- 培養、滅菌が容易
- 遺伝子操作が簡単
- 安全な宿主
内容
-
pNI DNA（製品コード HB131） 10 μg（0.2 μg/μl）
pNI-His DNA（製品コード HB132） 10 μg（0.2 μg/μl）
保存
－20℃
DNAシーケンスデータ
ZIP形式で圧縮しておりますが、StuffIt Expander等でも解凍できます。
Brevibacillus発現システム菌体内発現ベクターの概略
- 発現ベクターの選択
- pNI DNA
pNI DNAは、分泌発現用ベクターであるpNCMO2 DNA（製品コード HB112）から分泌シグナル部分を除去して菌体内に生産物が蓄積するように作られた菌体内発現用ベクターである。それ以外の基本的な構造はpNCMO2 DNAと共通である。Brevibacillusと大腸菌のシャトルベクターで、大腸菌内で発現プラスミドを構築後、Brevibacillusに導入、発現試験に進むことが出来る。
pNI DNAの発現プロモーターには宿主菌の細胞壁タンパク質由来のP2プロモーターを用いている。P2プロモーターは大腸菌内では働きが弱いため、目的遺伝子のクローニングに有利である。一方、Brevibacillusにおいては非常に強いプロモーターとして働く。従って、Brevibacillusでの効率的なタンパク質生産に適している。 - pNI-His DNA
pNI-His DNAはコバルトあるいはニッケルキレート樹脂により生産物を簡単に精製出来るように、N末にHisタグ配列（6×His配列）およびタグ除去のためのEnterokinase認識配列が付加されるように作られた菌体内発現用ベクターである。それ以外はpNI DNAと共通である。
図1. pNI DNAのベクターマップ - pNI DNA
- 発現ベクターへのクローニング
pNI DNAの場合はNco I に始まるマルチクローニングサイトに目的タンパク質の遺伝子を挿入する。Nco Iサイトが使える場合には、マルチクローニングサイトに由来する余分なアミノ酸が目的タンパク質に付加されることはないが、Nco Iサイト以外の場合には使うサイトに応じて余分なアミノ酸がN末に付加される。
pNI-His DNAの場合には目的タンパク質の遺伝子はBamH I以後のサイトに挿入する。 - Brevibacillusの形質転換
Brevibacillusの形質転換はNTP法によって行い、特別な装置は不要である。選択はネオマイシン耐性によって行う。シャトルベクターを用いて大腸菌でサブクローニングする場合は、アンピシリン耐性によって選択する。 - タンパク質生産の確認とスケールアップ
ネガティブコントロールを同時に培養し、目的タンパク質の発現を確認する。目的タンパク質発現プラスミドを導入した形質転換体をピックアップし、指定の液体培地で振とう培養することにより、48～64時間で目的のタンパク質が得られる。培養菌体をSDS-PAGE等で解析することにより、発現の有無が確認できる。高い生産量が必要とされる場合には、スケールアップを行う。Brevibacillusのラージスケールでの培養は比較的容易である。
使用上の注意
本製品と共に使用する、Brevibacillus choshinensis HPD31-SP3には、Saccharomyces cerevisiae由来2μmプラスミドDNAの部分配列が含まれます（製品コード HB200、HB116）。これらは、「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」で規定する遺伝子組換え生物等に該当します。ご使用の際は、「研究開発等に係る遺伝子組換え生物等の第二種使用等に当たって執るべき拡散防止措置を定める省令」（平成16年文科省・環境省令第1号）および貴組織内の安全委員会の指示に従ってください。
ブレビバチルス発現システム関連製品は、ヒゲタ醤油株式会社が開発・製造し、タカラバイオ株式会社が販売しています。本製品は研究目的にのみ使用が許可されています。
製品ご購入に際しては、添付のライセンス同意書に必要事項を記入の上、ご注文の際に弊社販売店までお渡しください。本同意書が添付されていない場合は製品の出荷ができませんのでご注意ください。ライセンスに関するご質問は下記へご連絡ください。
ブレビバチルス発現システム関連製品は、ヒゲタ醤油株式会社が開発・製造し、タカラバイオ株式会社が販売しています。本製品は研究目的にのみ使用が許可されています。
製品ご購入に際しては、添付のライセンス同意書に必要事項を記入の上、ご注文の際に弊社販売店までお渡しください。本同意書が添付されていない場合は製品の出荷ができませんのでご注意ください。ライセンスに関するご質問は下記へご連絡ください。
| タカラバイオ（株） 営業部 営業支援担当 TEL：077-565-6972 FAX：077-565-6987 |
ライセンス同意書 |
この製品を見た人は、
こんな製品も見ています
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
- タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
- タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。
また、他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。 - ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
