簡単・便利なディレクショナルクローニングキット
- 任意のベクターの任意の位置にディレクショナルクローニングが可能
- ベクターの末端配列15塩基を目的DNA増幅用プライマーに付加してPCR産物を調製するだけ
- 余分な配列をいっさい付加しない
- 15 kb断片のクローニング実績あり。複数断片の同時クローニングも可能
- 世界中の研究室で広く利用されている
「In-Fusionクローニングのススメ」
好評公開中！
製品説明
ClontechのIn-Fusionクローニングシステムは、それぞれのDNA断片の末端15塩基が相同であれば、短時間に効率よく、In-Fusion酵素がそれらのDNA断片を融合することができる。制限酵素切断や平滑末端化処理、リガーゼ反応などを行うことなく、1ステップの反応でPCR断片を任意のベクターにクローニングできる。In-Fusion HD Cloning Kitはプレミックスタイプであり、反応時間はわずか15分、クローニング効率が高く、質の高いクローニングを行える。
効率のよいIn-Fusionクローニングなら、最小限のスクリーニングで適切なクローンが得られる。また、2つのDNA断片の結合のみならず、1度の反応で4つのDNA断片を適切に連結することも可能である（1）。In-Fusionクローニング法はハイスループット（HTP）な系にも有用であり、ハーバード大学医学部（2）やスタンフォード大学医学部（3）、オックスフォード大学（4）などのHTPプロジェクトでも活躍している。
効率のよいIn-Fusionクローニングなら、最小限のスクリーニングで適切なクローンが得られる。また、2つのDNA断片の結合のみならず、1度の反応で4つのDNA断片を適切に連結することも可能である（1）。In-Fusionクローニング法はハイスループット（HTP）な系にも有用であり、ハーバード大学医学部（2）やスタンフォード大学医学部（3）、オックスフォード大学（4）などのHTPプロジェクトでも活躍している。
In-Fusion反応の概略
図1. In-Fusionクローニング
- 利用するベクターの末端配列に相同な15塩基を、目的遺伝子増幅用プライマーの5'末端に付加し、目的遺伝子をPCR増幅する。
- 増幅産物がシングルバンドであればCloning Enhancer処理*1を行い、複数のバンドが見られる場合はゲルから精製して、In-Fusion酵素で線状化ベクター*2と結合する（In-Fusion反応：50℃、15分）。
w/Cloning Enhancerタイプの製品に含まれるCloning Enhancerは、PCR産物をそのままIn-Fusion反応に使用するための独自の前処理試薬である。PCR終了後の反応液に本試薬を加えて30分間インキュベートするだけで、そのままIn-Fusion反応に使用できる。PCR産物の精製ステップが不要となり、試料のロスも少なくなる。 - In-Fusion反応液で形質転換を行い、目的クローンをスクリーニングする。
他社同等品との違いはこちら
＞＞In-Fusionと他社シームレスクローニングキットは何が違うの？
In-Fusionプライマーの設計
In-Fusionクローニング用プライマーの設計および目的DNA断片の増幅は、基本的に通常のPCRプライマーの設計、PCR増幅と同じである。唯一の違いは、利用するベクターの末端配列に相同な15塩基を、配列特異的プライマーの5’末端に付加することである（下図参照）。
お手持ちのベクターに対するIn-Fusion用プライマーの設計には、便利なオンラインツール「In-Fusionクローニング用プライマー設計サイト（In-Fusion Cloning Primer Design Tool）」をご利用ください。
※ リンク先はTB USA社サイトです。デザインツールが更新され、より使いやすくなりました。
※ これまでお使いいただいていた「In-Fusionクローニング用プライマー設計サイト（Primer Design tool for In-Fusion）」はこちらから
お手持ちのベクターに対するIn-Fusion用プライマーの設計には、便利なオンラインツール「In-Fusionクローニング用プライマー設計サイト（In-Fusion Cloning Primer Design Tool）」をご利用ください。
※ リンク先はTB USA社サイトです。デザインツールが更新され、より使いやすくなりました。
※ これまでお使いいただいていた「In-Fusionクローニング用プライマー設計サイト（Primer Design tool for In-Fusion）」はこちらから
In-Fusionクローニング製品選択ガイド
内容
In-Fusion HD Cloning Kit*2
（製品コード 639648、639649、639650、638933）
・5×In-Fusion HD Enzyme Premix
・pUC19 Control Vector, linearized
・2 kb Control Insert
In-Fusion HD Cloning Kit w/Cloning Enhancer*2
（製品コード 639633、639634、639635）
・5×In-Fusion HD Enzyme Premix
・pUC19 Control Vector, linearized
・2 kb Control Insert
・Cloning Enhancer*1
（製品コード 639648、639649、639650、638933）
・5×In-Fusion HD Enzyme Premix
・pUC19 Control Vector, linearized
・2 kb Control Insert
In-Fusion HD Cloning Kit w/Cloning Enhancer*2
（製品コード 639633、639634、639635）
・5×In-Fusion HD Enzyme Premix
・pUC19 Control Vector, linearized
・2 kb Control Insert
・Cloning Enhancer*1
| *1 | PCR産物をそのままIn-Fusion反応に使用するための前処置試薬 |
| *2 | これらのキットにはコンピテントセルが添付されていません。形質転換には、効率の高いE. coli HST08 Premium Competent Cells（製品コード 9128）、Stellar Competent Cells（製品コード 636763）などをご利用ください。 また、これらのキットとStellar Competent Cellsがそれぞれセットになった製品、In-Fusion HD Cloning Kit w/Competent Cells（製品コード 639642～639644）もご利用ください。 |
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オンラインツール
クローニング実験ハンドブック
下記よりPDFでご覧いただけます。
|
印刷物はこちらからご請求ください。（資料請求フォームへ） |
Application
ユーザー様実施例：In-Fusion Cloning Kitを用いた4断片マルチクローニングの成功
In-Fusion® HD Cloning KitとA社同等品の比較実験（TB USA社取得データ）
ユーザー様実施例：In-Fusion® Cloning Systemを用いて3つのPCR productからベクターを構築
ユーザー様実施例：3つのインサートをIn-Fusion® Cloning Systemで同時にクローニング（他社同等キットとの比較）
ユーザー様実施例：4つのインサートをIn-Fusion® Cloning Systemで同時にクローニング
ユーザー様実施例：In-Fusion® Cloning Kitと他社同タイプキットの比較実施例
ユーザー様実施例：In-Fusion® Cloning Systemを用いたゲノム編集ノックイン用ドナーベクターの構築（3断片のマルチクローニング）
ユーザー様実施例：In-Fusion® Cloning Kitを使用したAAVベクターの改変
長鎖フラグメントのクローニング
複数フラグメントの同時クローニング
In-Fusion反応におけるインサートサイズとクローニング効率
In-Fusion簡易プロトコールによる2断片の同時クローニング
ユーザー様実施例：P2A配列の挿入
ユーザー様実施例：人工ライブラリの作製
ユーザー様実施例：訳あって、PCR産物を制限酵素処理できない時
ユーザー様実施例：遺伝子のクローニング
Technical Notes
In-Fusionを用いた変異の少ない正確な目的配列のクローニング（日本語）
モノクローナル抗体開発のための迅速、確実なハイスループットクローニング（日本語）
In-Fusionを用いたsgRNAの簡単クローニング（日本語）
In-Fusionクローニングによる簡単な遺伝子設計（日本語）
In-Fusion 技術を用いたシグナル伝達系タンパク質ドメイン発現
コンストラクトの正確なハイスループット・クローニング（日本語）
クロンテック製品の組合せ使用による簡単・迅速なタンパク質の発現と精製（日本語）
In-Fusionによる複数断片の正確かつ効率的な同時クローニング（英語）
モノクローナル抗体開発で迅速、確実なハイスループット・クローニングが可能（英語）
In-Fusionと他社シームレスクローニングキットは何が違うの？
In-Fusionについて3つの動画でわかりやすくご紹介！
クローニングキット選択ガイド ＆ 実験オンラインツール
In-Fusion®クローニングキットの実施例
In-Fusionユーザーズボイス一挙ご紹介
In-Fusion®クローニング製品選択ガイド
In-Fusion®モニター結果を大発表！
クローニング実験アンケートの結果
使用文献・参考文献
関連製品・受託
In-Fusion® Snap Assembly Master Mix
In-Fusion® HD EcoDry™ Cloning Kit
PrimeSTAR® Max DNA Polymerase
In-Fusion® Ready Products
E. coli HST08 Premium Competent Cells
Stellar™ Competent Cells
NucleoSpin® Gel and PCR Clean-up
大腸菌タンパク質発現＆精製キット
pHEK293 Ultra Expression Vector
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- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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