全血からのRNAハイスループット精製
- 8ウェルストリップまたは96ウェルプレートを用いる全血からのハイスループットRNA精製
- 室温での簡便なプロトコールで全血から直接抽出 4℃で赤血球を溶解する前処理は不要
- 新鮮血および凍結保存した400 μlまでの全血からのRNA精製が可能
- オンカラムでのDNase処理により、ゲノムDNAを効果的に除去
- 手動または自動化装置に対応
- MN Wash Plateの使用によりウェル間のコンタミネーションリスクを低減
製品説明
NucleoSpin 8/96 RNA Bloodは、新鮮血および凍結保存した全血（EDTA血、クエン酸血、ヘパリン血など）から簡便な方法でRNAをハイスループット精製するためのキットである。グアニジンイソチオシアネートによる強力な血液溶解、DNaseによる確実なDNA分解、シリカメンブレンによる迅速な操作により、ウェル間のコンタミネーションを起こすことなく、再現性のよい高純度、高収率なRNA精製を行うことができ、マイクロアレイ解析、遺伝子発現プロファイリング、創薬、遺伝子診断などに非常に有用である。本製品は吸引法のほか、追加の消耗品を用意することで遠心法でも使用できる。
まず、大量のカオトロピックイオンを含むLysis Bufferを加えて血中の細胞を溶解する。Lysis BufferによりRNaseは速やかに失活し、RNAをシリカメンブレンに吸着させる条件を整えることができる。DNAもRNAと共にシリカメンブレンに吸着するが、メンブレン上での室温15分のDNase処理で除去される。3種類の洗浄バッファーを用いた簡単な洗浄ステップにより塩類や代謝産物、高分子の細胞成分を除き、最後にRNase-free水を用いて低イオン強度条件で精製RNAを溶出する。
*1 遠心分離法で使用する場合には、別途廃液回収用の消耗品（MN Square-well Blockなど）が必要である。
*2 RNAの回収量は血液サンプル中に含まれる白血球数に依存する。
まず、大量のカオトロピックイオンを含むLysis Bufferを加えて血中の細胞を溶解する。Lysis BufferによりRNaseは速やかに失活し、RNAをシリカメンブレンに吸着させる条件を整えることができる。DNAもRNAと共にシリカメンブレンに吸着するが、メンブレン上での室温15分のDNase処理で除去される。3種類の洗浄バッファーを用いた簡単な洗浄ステップにより塩類や代謝産物、高分子の細胞成分を除き、最後にRNase-free水を用いて低イオン強度条件で精製RNAを溶出する。
| NucleoSpin 8 RNA Blood | NucleoSpin 96 RNA Blood | |
|---|---|---|
| 原理 | シリカメンブレン法 | |
| 形状 | 8ウェルストリップ | 96ウェルプレート |
| 操作 | 手動または自動化装置、吸引または遠心分離*1 | |
| サンプル量 | ＜400 μl全血（新鮮血、凍結保存血） | |
| 精製サイズ | ＞200 base | |
| 回収量 | 1～8 μg（400 μl 全血）*2 | |
| A260/280 | 1.9～2.1 | |
| 溶出液量 | 50～130 μl | |
| 操作時間 | 60分 | 100分 |
| 結合容量 | 100 μg | |
*2 RNAの回収量は血液サンプル中に含まれる白血球数に依存する。
内容
・Lysis Buffer DL
・Wash Buffer RB2
・Wash Buffer RB3 (Concentrate)
・Wash Buffer RB4 (Concentrate)
・RNase-free H2O
・Reaction Buffer for rDNase
・rDNase, RNase-free（凍結乾燥品）
・Liquid Proteinase K
・NucleoSpin RNA Blood Binding Strips or Plates
・MN Wash Plates
・Rack of Tube Strips（NS 8 RNA Bloodのみ）
・Round-well Block Low (including one Self-adhering PE Foil)(NS 96 RNA Bloodのみ)
・Square-well Blocks (including one self-adhering PE-Foil)
・Elution Plates U-bottom (including one Self-adhering PE Foil)
・Wash Buffer RB2
・Wash Buffer RB3 (Concentrate)
・Wash Buffer RB4 (Concentrate)
・RNase-free H2O
・Reaction Buffer for rDNase
・rDNase, RNase-free（凍結乾燥品）
・Liquid Proteinase K
・NucleoSpin RNA Blood Binding Strips or Plates
・MN Wash Plates
・Rack of Tube Strips（NS 8 RNA Bloodのみ）
・Round-well Block Low (including one Self-adhering PE Foil)(NS 96 RNA Bloodのみ)
・Square-well Blocks (including one self-adhering PE-Foil)
・Elution Plates U-bottom (including one Self-adhering PE Foil)
キット以外に必要な試薬・器具（主なもの）
・96～100%エタノール
・Vacuum Manifold（NucleoVac Vaccum Manifold（製品コード 740681）など）
・マイクロタイタープレート対応の遠心機（遠心法の場合）
・Starter Set A（製品コード 740682）：NucleoSpin 8 RNA BloodをNucleoVac 96 Vacuum Manifoldを用いて使用する際に必要
・Starter Set C（製品コード 740684）：NucleoSpin 8 RNA Bloodを遠心法で使用する際に必要
・Vacuum Manifold（NucleoVac Vaccum Manifold（製品コード 740681）など）
・マイクロタイタープレート対応の遠心機（遠心法の場合）
・Starter Set A（製品コード 740682）：NucleoSpin 8 RNA BloodをNucleoVac 96 Vacuum Manifoldを用いて使用する際に必要
・Starter Set C（製品コード 740684）：NucleoSpin 8 RNA Bloodを遠心法で使用する際に必要
保存
rDNase, RNase-free（凍結乾燥品）：4℃
その他：室温
その他：室温
操作手順
用途
- 手動または自動化装置による全血からのRNA精製
- 精製RNAはリアルタイムRT-PCR、次世代シーケンス、ブロッティング、アレイ解析などに使用可能
NucleoSpinはマッハライ・ナーゲル社の登録商標です。
Technical Notes
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- 注意事項
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