操作簡便な1 step RT-qPCR試薬（2コンポーネントタイプ）
- 2×バッファーとプレミックス酵素の2コンポーネントタイプで操作が簡便
- バッファー組成の改良で特異性が改善
製品説明
One Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit II (Perfect Real Time)は、インターカレーター法による1ステップリアルタイムRT-PCR専用のキットである *。RT-PCRを1チューブ内で連続的に行えるため、操作が簡便でコンタミネーションの心配がない。また、増幅産物をリアルタイムで検出でき、PCR後に電気泳動などで確認する必要がない。
反応には、伸長性に優れたPrimeScript RTaseとTaKaRa Ex Taq HSを用い、反応系を1ステップリアルタイムRT-PCR用に至適化している。
本製品では、バッファー組成の改良により従来品の（製品コード RR066A）に比べ反応特異性が改善している。また、反応に使用するすべての酵素がEnzyme Mixの形状となっており、操作もより簡便になった。
本製品の適応機種
本製品は、以下の各種リアルタイムPCR装置で良好に反応できることを確認している。
技術情報のProtocolsや説明書を参照してください。
反応には、伸長性に優れたPrimeScript RTaseとTaKaRa Ex Taq HSを用い、反応系を1ステップリアルタイムRT-PCR用に至適化している。
本製品では、バッファー組成の改良により従来品の（製品コード RR066A）に比べ反応特異性が改善している。また、反応に使用するすべての酵素がEnzyme Mixの形状となっており、操作もより簡便になった。
本製品の適応機種
本製品は、以下の各種リアルタイムPCR装置で良好に反応できることを確認している。
技術情報のProtocolsや説明書を参照してください。
- Thermal Cycler Dice Real Time System III（製品コード TP950/TP970/TP980/TP990）
- Thermal Cycler Dice Real Time System II (製品コード TP900/TP960：終売)
- Thermal Cycler Dice Real Time System Lite (製品コード TP700/TP760：終売)
- CronoSTAR 96 Real-Time PCR System（製品コード 640231/640232）
- CronoSTAR Portable Real-Time PCR System（製品コード 640245/640247/640249）
- Applied Biosystems 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR System
StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社） - LightCycler（Roche Diagnostics社）など
(注) Smart Cycler System/Smart Cycler II System（Cepheid社）には、One Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time)（製品コード RR066A/B）またはOne Step TB Green PrimeScript PLUS RT-PCR Kit (Perfect Real Time)（製品コード RR096A/B）の使用を推奨します。
内容
（100回分；50 μl反応系）
*1 dNTP Mixture、Mg2+およびTB Greenを含む。
*2 PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、TaKaRa Ex Taq HSを含む。
*3 Thermo Fisher Scientific社 のリアルタイムPCR 装置など、ウェル間の蛍光シグナルの補正を行う装置で解析する場合に使用する。
◆ROX Reference Dye を添加する機種
・Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
・StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
◆ROX Reference Dye II を添加する機種
・Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
◆添加の必要がない機種
・Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ（製品コード TP950/TP970/TP980/TP990、TP900/TP960/TP700/TP760：終売）
・CronoSTAR 96 Real-Time PCR System（製品コード 640231/640232）
・CronoSTAR Portable Real-Time PCR System（製品コード 640245/640247/640249）
・LightCycler（Roche Diagnostics社）
| 2×One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 *1 | 840 μl×3 |
| PrimeScript 1step Enzyme Mix 2 *2 | 200 μl |
| RNase Free dH2O | 1.25 ml×2 |
| ROX Reference Dye (50×conc.) *3 | 100 μl |
| ROX Reference Dye II (50×conc.)*3 | 100 μl |
*1 dNTP Mixture、Mg2+およびTB Greenを含む。
*2 PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、TaKaRa Ex Taq HSを含む。
*3 Thermo Fisher Scientific社 のリアルタイムPCR 装置など、ウェル間の蛍光シグナルの補正を行う装置で解析する場合に使用する。
◆ROX Reference Dye を添加する機種
・Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
・StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
◆ROX Reference Dye II を添加する機種
・Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
◆添加の必要がない機種
・Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ（製品コード TP950/TP970/TP980/TP990、TP900/TP960/TP700/TP760：終売）
・CronoSTAR 96 Real-Time PCR System（製品コード 640231/640232）
・CronoSTAR Portable Real-Time PCR System（製品コード 640245/640247/640249）
・LightCycler（Roche Diagnostics社）
保存
－20℃
2×One Step TB Green RT-PCR Buffer 4は、遮光して－20℃にて保存すること。
2×One Step TB Green RT-PCR Buffer 4は、遮光して－20℃にて保存すること。
キット以外に必要な試薬、機器（主なもの）
- リアルタイムPCR装置（authorized instruments）
- 専用反応チューブあるいはプレート
- PCR用プライマー*1
- マイクロピペットおよびチップ（オートクレーブ処理したもの）
*1 PCR用プライマーの設計方法は、「プライマー設計について」をご参照ください。
使用上の注意
本キットによる逆転写反応には、PCR用のSpecific Primer (Reverse)を用いる。Random PrimerやOligo dT Primerは使用できない。
特長
- 1ステップリアルタイム RT-PCRにより、RNAウイルスなど微量RNAの解析を迅速かつ正確に行うことができる。
- 逆転写には伸長性に優れたPrimeScript RTaseを、PCRにはホットスタート用酵素TaKaRa Ex Taq HSを用いている。バッファー系は1ステップリアルタイムRT-PCR用に至適化されているため、増幅効率が良く、高感度な検出が可能である。また、バッファーはTB Greenをあらかじめ含む2×濃度のプレミックスであり、酵素類もプレミックス化しているため、反応液の調製が簡単である。
リアルタイムRT-PCR用プライマーを作製します「Perfect Real Timeサポートシステム」
Perfect Real Timeサポートシステム for インターカレーターは、インターカレーター法（TB Green検出）によるリアルタイムRT-PCR用に最適化されたプライマーを検索・オンライン注文するためのシステムです。
ヒト、マウス、ラット、ウシ、イヌ、ニワトリ、イネ、シロイヌナズナのRefSeq登録遺伝子またはEnsembl Plants登録遺伝子に対して網羅的にリアルタイムRT-PCR用のプライマーを設計しています。
ターゲット遺伝子を検索し、ご希望のプライマーセットを選択すれば簡単にオンラインで注文できます。わずらわしいプライマー設計と反応条件の至適化作業はもう不要です。siRNAの効果の確認、DNAマイクロアレイ解析結果の検証など遺伝子発現定量や遺伝子検出にどうぞお気軽にご利用ください。
サポートシステムはこちら
* プライマーによっては1ステップの系では十分に性能を発揮できない場合がありますが、その場合にはTB Green Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）（製品コード RR820S/A/B）または TB Green Premix Ex Taq（Tli RNaseH Plus）（製品コード RR420S/A/B）等を用いる2ステップRT-PCRでお試しください。
ヒト、マウス、ラット、ウシ、イヌ、ニワトリ、イネ、シロイヌナズナのRefSeq登録遺伝子またはEnsembl Plants登録遺伝子に対して網羅的にリアルタイムRT-PCR用のプライマーを設計しています。
ターゲット遺伝子を検索し、ご希望のプライマーセットを選択すれば簡単にオンラインで注文できます。わずらわしいプライマー設計と反応条件の至適化作業はもう不要です。siRNAの効果の確認、DNAマイクロアレイ解析結果の検証など遺伝子発現定量や遺伝子検出にどうぞお気軽にご利用ください。
サポートシステムはこちら
* プライマーによっては1ステップの系では十分に性能を発揮できない場合がありますが、その場合にはTB Green Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）（製品コード RR820S/A/B）または TB Green Premix Ex Taq（Tli RNaseH Plus）（製品コード RR420S/A/B）等を用いる2ステップRT-PCRでお試しください。
リアルタイムPCR関連実験の各種手法をホームページでご紹介しています。あわせてご参照ください。
Protocols
Thermal Cycler Dice® Real Time Systemシリーズを用いる場合の操作方法
Applied Biosystems 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR SystemおよびStepOnePlus Real-Time PCR Systemを用いる場合の操作方法
LightCyclerを用いる場合の操作方法
Application
使用文献・参考文献
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- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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