切断反応後の制限酵素を失活させるには、一般的に加熱処理が行われている。しかし、酵素によってその耐熱性が異なり、DNA変性温度を考慮すると制限酵素を完全失活させるには、加熱処理だけでは不充分な場合もある。
そこで、それぞれの酵素について4種の失活処理を行ってその残存活性を測定し、制限酵素完全失活条件を検討した。
そこで、それぞれの酵素について4種の失活処理を行ってその残存活性を測定し、制限酵素完全失活条件を検討した。
1．60℃、15 min加熱処理 2．70℃、15 min加熱処理 3．エタノール沈殿処理 4．フェノール処理－エタノール沈殿処理
| 制限酵素 | 60℃, 15 min | 70℃, 15 min | エタノール沈殿 | フェノール処理 |
| Aat II | ＋ | － | － | NT |
|---|---|---|---|---|
| Acc I | ＋ | － | － | NT |
| Acc II | ＋ | ＋ | － | NT |
| Acc III | NT | － | － | NT |
| Afa I | ＋ | － | ＋ | － |
| Afl II | － | － | － | － |
| Alu I | － | NT | ＋ | － |
| Aor13H I | NT | ＋ | ＋ | － |
| Aor51H I | － | NT | － | NT |
| Apa I | － | NT | － | NT |
| ApaL I | ＋ | － | － | NT |
| Bal I | － | － | － | － |
| BamH I | ＋ | ＋ | － | － |
| Ban II | － | NT | － | NT |
| Bci T130 I | ＋ | ＋ | － | － |
| Bcn I | ＋ | ＋ | － | NT |
| Bgl I | － | NT | ＋ | － |
| Bgl II | ＋ | － | ＋ | － |
| Bln I | ＋ | ＋ | － | － |
| BmeT110 I | － | NT | － | NT |
| BmgT120 I | ＋ | ＋ | － | NT |
| Bpu1102 I | ＋ | ＋ | ＋ | － |
| BspT104 I | ＋ | ＋ | － | － |
| BspT107 I | － | NT | － | NT |
| Bsp1286 I | － | NT | － | NT |
| Bsp1407 I | ＋ | － | ＋ | － |
| BssH II | ＋ | － | － | NT |
| BstP I | NT | ＋ | － | NT |
| BstX I | － | NT | － | NT |
| Bst1107 I | ＋ | ＋ | ＋ | － |
| Cfr10 I | ＋ | ＋ | ＋ | － |
| Cla I | ＋ | － | － | － |
| Cpo I | － | NT | － | NT |
| Dde I | ＋ | － | － | － |
| Dra I | － | NT | － | NT |
| Dpn I | ＋ | － | ＋ | － |
| Eae I | － | NT | － | NT |
| Eam1105 I | － | NT | ＋ | － |
| EcoO65 I | ＋ | － | ＋ | － |
| EcoO109 I | － | NT | － | NT |
| EcoR I | － | NT | － | NT |
| EcoR V | ＋ | － | ＋ | － |
| EcoT14 I | － | NT | － | NT |
| EcoT22 I | － | NT | － | NT |
| Eco52 I | － | NT | ＋ | － |
| Eco81 I | ＋ | － | － | NT |
| Fba I | ＋ | ＋ | － | NT |
| Fok I | － | NT | ＋ | － |
| Hae II | － | － | － | － |
| Hae III | ＋ | － | － | NT |
| Hap II | ＋ | － | ＋ | － |
| 制限酵素 | 60℃, 15 min | 70℃, 15 min | エタノール沈殿 | フェノール処理 |
| Hha I | ＋ | － | － | － |
|---|---|---|---|---|
| Hinc II | ＋ | － | － | NT |
| Hind III | ＋ | － | － | NT |
| Hinf I | ＋ | － | － | NT |
| Hin1 I | － | NT | ＋ | － |
| Hpa I | － | NT | － | NT |
| Kpn I | － | NT | － | NT |
| Mbo I | ＋ | － | － | － |
| Mbo II | ＋ | － | － | NT |
| Mfl I | ＋ | ＋ | ＋ | － |
| Mlu I | ＋ | ＋ | － | NT |
| Msp I | ＋ | ＋ | ＋ | － |
| Mun I | ＋ | － | ＋ | － |
| Nae I | － | NT | － | NT |
| Nco I | ＋ | － | ＋ | － |
| Nde I | － | － | － | － |
| Nhe I | ＋ | － | － | NT |
| Not I | － | － | ＋ | － |
| Nru I | － | NT | ＋ | － |
| Nsb I | ＋ | － | ＋ | － |
| PmaC I | － | NT | － | NT |
| PshA I | － | NT | － | NT |
| PshB I | ＋ | － | － | NT |
| Psp1406 I | － | NT | ＋ | － |
| Pst I | － | NT | － | NT |
| Pvu I | － | － | － | － |
| Pvu II | ＋ | ＋ | ＋ | － |
| RspRS II | NT | ＋ | ＋ | － |
| Sac I | － | NT | － | NT |
| Sac II | ＋ | － | ＋ | － |
| Sal I | － | － | － | － |
| Sau3A I | ＋ | － | － | NT |
| Sca I | － | NT | － | NT |
| Sfi I | ＋ | － | ＋ | － |
| Sma I | － | NT | ＋ | － |
| Smi I | ＋ | ＋ | ＋ | － |
| SnaB I | － | NT | － | NT |
| Spe I | － | NT | － | NT |
| Sph I | － | NT | － | NT |
| Sse8387 I | － | NT | － | NT |
| Ssp I | － | NT | － | NT |
| Stu I | － | NT | ＋ | － |
| Taq I | NT | ＋ | ＋ | － |
| Tth111 I | NT | ＋ | － | NT |
| Van91 I | － | NT | ＋ | － |
| VpaK11B I | － | NT | － | NT |
| Xba I | － | － | － | － |
| Xho I | ＋ | ＋ | － | － |
| Xsp I | ＋ | ＋ | ＋ | － |
+：残存活性あり
-：残存活性なし
NT：未試験
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