Lacto-N-biosidase

Lacto-N-biosidaseは、I型糖鎖構造に特異的に作用して糖鎖の非還元末端からlacto-N-biose（Galβ1-3GlcNAc）を遊離するが、II型糖鎖には全く作用しない^{1, 2）}。糖タンパク質や糖脂質糖鎖のI型、II型構造の判別に利用できる。また、α-1,3/4-L-Fucosidase（製品コード 4453）と組み合わせて用いることにより、Lewis^a構造とLewis^x構造を識別することができる。糖タンパク質や糖脂質糖鎖の構造と機能の解明に有用である。本酵素100 μU（1 vial分）で、糖鎖　～10 pmolに対して、およそ50～100回分の酵素消化が行える。

－20℃

oligosaccharide lacto-N-biosylhydrolase

3.2.1.140

Streptomyces sp.142

溶液[0.05% Brij 58を含む50 mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH5.5）]

1μU/μl

37℃、pH5.5においてPA-lacto-N-tetraoseから1分間に1μmolのPA-lactoseを生成する酵素量を1 Uとする。

2μMのPA-lacto-N-tetraose（PA-Sugar Chain 042；製品コード 4142）を含む40 mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH5.5）中、37℃で20分間酵素反応を行わせた後、1%のトリフルオロ酢酸を加えて反応を止める。反応液をHPLCで分析して、生成物［PA-lactose、（PA-Sugar Chain 026；製品コード 4126）］の量から酵素活性を算出する。

1．残存エキソグリコシダーゼ活性およびエンドグリコシダーゼ活性
合成基質：p-NP-glycoside 1.1 mMを含む40 mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH4.5）225 μlに本酵素標品25μlを加えて37℃で16時間反応を行わせた後、1 M炭酸ナトリウム250μlを加えて反応を停止し、405 nmにおける反応液の吸光度を測定する。
活性の検出限界は1 μU/ml。
糖鎖基質：適当なPA-Sugar Chain 2μMを含む40 mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH5.5）8 μlに本酵素標品2 μlを加えて37℃で16時間反応を行わせた後、1%のトリフルオロ酢酸を加えて反応を止める。反応液をHPLCで分析して、生成物の有無を調べる。
活性の検出限界は0.1 μU/ml。

残存グリコシダーゼ活性	合成基質	糖鎖基質
α-Fucosidase	＜0.005%	＜0.01%
α-Galactosidase	＜0.02%	ND
β-Galactosidase	ND	ND
α-Glucosidase	NT	ND
β-Glucosidase	＜0.005%	＜0.015%
β-N-Acetylhexosaminidase	＜0.5%	ND
α-N-Acetylgalactosaminidase	NT	ND
α-Mannosidase	ND	ND
β-Mannosidase	＜0.005	NT
Sialidase	NT	ND
Endo-β-N-acetylglucosaminidase	NT	ND

ND；Not detected, NT；Not tested

2．残存プロテアーゼ活性
酸化インスリンB鎖0.4 mMを含む200 mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH5.5）10 μlに本酵素標品10 μlを加えて37℃で16時間反応させた後、反応液を逆相系HPLCで分析した結果、基質（酸化インスリンB鎖）以外のピークを認めなかった。