フコースの結合を識別
仕様変更のお知らせ
本製品はlot. N104AAより、製品仕様が変更になりましたのでご注意ください。
・形状が凍結乾燥品から溶液品に変更になりました。
・酵素の保存温度が4℃以下から－20℃に変更になりました。
・形状が凍結乾燥品から溶液品に変更になりました。
・酵素の保存温度が4℃以下から－20℃に変更になりました。
保存
－20℃（凍結融解のくり返しは避ける。必要に応じて小分け分注し、－20℃保存）
系統名
α-L-Fucoside fucohydrolase
酵素番号
3.2.1.51
由来
Corynebacterium sp.
反応
糖鎖中のα1,2-L-フコシド結合を特異的に切断する。
天然基質に対する作用
22-α-L-fucosyl lactose（Fucα1-2Galβ1-4Glc）およびporcine gastric mucin由来のオリゴ糖からL-Fucoseを遊離させることが確認されている。また、反応速度は非常に遅いがα1,6-フコシド結合をもつバイアンテナN-アセチルラクトサミン型糖鎖（製品コード 4109）にも作用してL-Fucoseを遊離させる1） 。（■基質特異性 参照）
形状
溶液品（0.5 mM EDTA、0.025%アジ化ナトリウムを含む50 mMリン酸カリウム緩衝液［pH8.0］）
濃度
20 U/ml
活性の定義
37℃、pH8.5においてp-Nitrophenyl-α-L-fucosideから1分間に1μmolのp-Nitrophenolを遊離させる酵素活性を1 Uとする。
活性測定法
0.7 mMのp-Nitrophenyl-α-L-fucosideを基質として、90 mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH8.5中、37℃で10分間反応を行った後、0.25 M炭酸ナトリウム溶液を加えて反応を止める。反応液の405 nmにおける吸光度から酵素活性を算出する。
一般的性質
| 分子量： | 約43,000 |
| ミカエリス定数： | Km＝4.7×10-5M（p-NP-α-L-fucopyranoside） |
| 阻害剤： | Ag+、Hg2+、Cu2+ |
| 至適pH： | pH8.5（37℃、10 min）（図1） |
| 至適温度： | 34℃（pH8.5、10 min）（図2） |
| pH安定領域： | pH5.5～9.5（25℃、60 min）（図3） |
| 熱安定領域： | 26℃以下（pH8.0、60 min）（図4） |
 図1 pH-活性曲線 |
 図2 温度-活性曲線 |
 図3 pH-安定性曲線 |
 図4 温度-安定性曲線 |
基質特異性
| 基 質 | 加水分解（%） | 比活性 (mU/mg) |
相対 活性 (%) |
|
| 1mU/ 1pmol (20min) |
30mU/ 1pmol (63hr) |
|||
PA-Sugar Chain 049（製品コード 4149） |
100 | 100 | 52 | 100 |
PA-Sugar Chain 045（製品コード 4145） |
0 | 0 | 0 | 0 |
PA-Sugar Chain 044（製品コード 4144） |
0 | 0 | 0 | 0 |
PA-Sugar Chain 043（製品コード 4143） |
45 | 100 | 0.78 | 1.5 |
PA-Sugar Chain 046（製品コード 4146） |
0 | 0 | 0 | 0 |
PA-Sugar Chain 009（製品コード 4109） |
0 | 100 | 0.0032 | 0.006 |
PA-Sugar Chain 005（製品コード 4105） |
0 | 0 | 0 | 0 |
純度
1．残存Protease活性
本酵素2 mUと酸化インスリンB鎖4 nmolとを、100 mMトリス塩酸緩衝液（pH8.0、最終液量150 μl）中にて37℃、16時間反応させた反応液を、逆相系HPLCで分析（検出：A215）した結果、基質（酸化インスリンB鎖）以外のピークを認めなかった。
2．残存Endoglycosidase活性
本酵素50 mUとピリジルアミノ化オリゴマンノース型糖鎖（M6、製品コード 4118）100 pmolとを、100 mM酢酸緩衝液（pH5.0、最終液量10 μl）中にて37℃、16時間反応させた反応液を、逆相系HPLCで分析（検出：蛍光Ex：320 nm、Em：400 nm）した結果、基質（糖鎖）以外のピークを認めなかった。
3．残存Exoglycosidase活性
本酵素20 mUと各基質500 nmolとを、100 mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH5.0、最終液量500 μl）中にて37℃、16時間反応させた後、1 M炭酸ナトリウムで反応を停止し、405 nmにおける反応液の吸光度を測定した結果、吸収を認めなかった。
（使用基質）
p-NP-α-D-Galactoside
p-NP-β-D-Galactoside
p-NP-α-D-Mannoside
p-NP-β-D-Xyloside
p-NP-β-N-Acetylglucosaminide
（p-NP：p-nitrophenyl）
4．残存α1,3-L-Fucosidaseおよびα1,4-L-Fucosidase活性
本酵素600 mUと各基質20 pmolとを、30 mMリン酸緩衝液（pH7.0、最終液量10 μl）中にて37℃、63時間反応させた反応液を、逆相系または順相系HPLCで分析（検出：蛍光Ex：320 nm、Em：400 nm）した結果、基質（糖鎖）以外のピークを認めなかった。
本酵素2 mUと酸化インスリンB鎖4 nmolとを、100 mMトリス塩酸緩衝液（pH8.0、最終液量150 μl）中にて37℃、16時間反応させた反応液を、逆相系HPLCで分析（検出：A215）した結果、基質（酸化インスリンB鎖）以外のピークを認めなかった。
2．残存Endoglycosidase活性
本酵素50 mUとピリジルアミノ化オリゴマンノース型糖鎖（M6、製品コード 4118）100 pmolとを、100 mM酢酸緩衝液（pH5.0、最終液量10 μl）中にて37℃、16時間反応させた反応液を、逆相系HPLCで分析（検出：蛍光Ex：320 nm、Em：400 nm）した結果、基質（糖鎖）以外のピークを認めなかった。
3．残存Exoglycosidase活性
本酵素20 mUと各基質500 nmolとを、100 mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH5.0、最終液量500 μl）中にて37℃、16時間反応させた後、1 M炭酸ナトリウムで反応を停止し、405 nmにおける反応液の吸光度を測定した結果、吸収を認めなかった。
（使用基質）
p-NP-α-D-Galactoside
p-NP-β-D-Galactoside
p-NP-α-D-Mannoside
p-NP-β-D-Xyloside
p-NP-β-N-Acetylglucosaminide
（p-NP：p-nitrophenyl）
4．残存α1,3-L-Fucosidaseおよびα1,4-L-Fucosidase活性
本酵素600 mUと各基質20 pmolとを、30 mMリン酸緩衝液（pH7.0、最終液量10 μl）中にて37℃、63時間反応させた反応液を、逆相系または順相系HPLCで分析（検出：蛍光Ex：320 nm、Em：400 nm）した結果、基質（糖鎖）以外のピークを認めなかった。
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