Cloned
反応用バッファー添付
製品説明
本酵素は反応に鋳型を必要とせず、一本鎖または二本鎖DNAの3’-OH末端にデオキシヌクレオチドを重合する反応を触媒する。プライマーとなるには最低3塩基以上のオリゴデオキシヌクレオチドが必要である。
TdTを用いたホモポリマーの付加反応の条件は、
TdTを用いたホモポリマーの付加反応の条件は、
- 付加する塩基の種類（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）
- バッファー中の二価イオンの種類（Mn2＋、Co2＋、Mg2＋）
- 付加されるDNAの末端構造（突出3’-OH末端、平滑末端、陥没3’-OH末端）
保存
－20℃
起源
E. coli carrying the plasmid which encodes the gene of terminal
deoxynucleotidyl transferase
濃度
7～15 U/μl
形状
| 60 mM | リン酸カリウム緩衝液（pH7.2） |
| 150 mM | KCl |
| 1 mM | DTT |
| 50% | グリセロール |
添付Buffer組成（5×）
（Tailing反応用）
| 500 mM | HEPES（pH7.2） |
| 40 mM | MgCl2 |
| 0.5 mM | DTT |
| 0.1% | BSA［別添付］ |
活性の定義
DNase処理後熱変性仔牛胸腺DNA（活性化仔牛胸腺DNA）をイニシエーターとして用い、37℃ pH7.2において、1時間に1 nmolの[3H]dTTPを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 100 mM | カコジル酸ナトリウム緩衝液（pH7.2） |
| 8 mM | MgCl2 |
| 0.1 mM | DTT |
| 0.024% | BSA |
| 160 μg/ml | 活性化仔牛胸腺DNA |
| 0.5 mM | [3H]dTTP |
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
使用上の注意
TdTの反応条件は、付加する塩基の種類（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）、バッファー中の二価イオンの種類（Mn2＋、Co2＋、Mg2＋）、および付加されるDNAの末端構造（突出3'-OH末端、平滑末端、陥没3'-OH末端）等に影響され、状況に応じた最適条件を見つけることが必要である。一般に、dATP、dTTPを付加する場合はCo2＋を含むバッファーが、dCTP、dGTPを付加する場合はMn2＋を含むバッファーが最適である。
また15～40 baseのデオキシヌクレオチドを付加する最適条件は、突出3'-OH末端の場合dNTPとDNAのモル比が20：1、陥没3'-OH末端の場合100：1である4, 5)。 * CoCl2 Buffer
MnCl2 Buffer
また15～40 baseのデオキシヌクレオチドを付加する最適条件は、突出3'-OH末端の場合dNTPとDNAのモル比が20：1、陥没3'-OH末端の場合100：1である4, 5)。 * CoCl2 Buffer
| 100 mM | カコジル酸ナトリウム（pH7.2） |
| 1 mM | CoCl2 |
| 0.1 mM | DTT |
| 100 mM | カコジル酸ナトリウム（pH7.2） |
| 2 mM | MnCl2 |
| 0.1 mM | DTT |
用途
- 標識dNTPまたはddNTPによるDNAの3’末端標識
- Okayama-Berg法によるベクターcDNAに相補的なホモポリマーの付加
一般的性質
- 分子量
60,000（遺伝子より推定） - 至適pH
pH7.2 - 補因子
Mg2＋、Mn2＋、CO2＋等の二価イオンのうちいずれかを要求する。 - 阻害剤
多くの陽イオン、陰イオンで阻害される。 - その他
ヌクレオチドアナログ（5-methyl-dCTP、6-O-methyl-dGTP等）も基質となり得る。ジデオキシチミジン3リン酸やコルディセピン3リン酸はターミネーターとなる。
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
- タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
- タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。
また、他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。 - ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
