Cloned
反応用バッファー添付
製品説明
本酵素は、SP6プロモーター配列を含む二本鎖DNAを鋳型、NTPを基質として、プロモーター下流の鋳型DNAに相補的な一本鎖RNAを合成する酵素である。SP6プロモーター配列に高い特異性を示し、他の生物由来のプロモーターを認識しない。
保存
－20℃
濃度
10～50 U/μl
形状
| 10 mM | リン酸カリウム緩衝液（pH7.9） |
| 1 mM | DTT |
| 0.1 mM | EDTA |
| 150 mM | NaCl |
| 50％ | グリセロール |
添付Buffer組成（10×）
| 400 mM | Tris-HCl（pH7.5） |
| 60 mM | MgCl2 |
| 20 mM | スペルミジン |
| 100 mM | DTT［別添付］ |
| 0.1％ | BSA［別添付］ |
活性の定義
37℃、pH7.5において、1時間に1 nmolの[3H]GMPを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 40 mM | Tris-HCl（pH7.5） |
| 6 mM | MgCl2 |
| 10 mM | DTT |
| 2 mM | スペルミジン |
| 各0.5 mM | ATP, UTP, CTP |
| 0.5 mM | [3H]GTP |
| 0.01％ | BSA |
| 1 μg/100 μl | pSP65 DNA |
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
使用上の注意
- 至適pHは7.5、Mg2＋と還元剤を要求し、BSAおよびスペルミジンの添加により活性化される3)。
- 使用時は添付Bufferに必ずDTTとBSAを添加すること。これらを含まない場合、活性が現れないことがある。
- 最適温度は40℃（37℃の約130％）で、酵素量は300 U/mlまで、template量は100 μg/mlまで合成量に正の相関を示す3)。反応時間が1時間を超える場合には、37℃の方がよい。
- 特定領域だけの効率のよい転写のためには、その領域下流で鋳型DNAを平滑型、または5'突出型にカットしておく方が望ましい4)。
用途
- 高標識RNAプローブの作製3)
- RNA splicing反応の前駆体の作製5)
- Cap analogをprimerに用いた、capped mRNAの作製6)
起源
Escherichia coli carrying the plasmid containing phage SP6 RNA polymerase gene1）
一般的性質
- 分子量
約96,000 - サブユニット
一本鎖単純ポリペプチド - 至適pH
pH7.5 - 補因子
Mg2＋（至適濃度：6 mM）
還元剤（10 mM DTT、または20 mM 2-メルカプトエタノール） - 活性化剤
2 mMスペルミジン（4 mMではDNAと共沈） - 阻害剤
NEM（10 －4M）、pCMB（5 × 10 －8M）で失活
相対活性
反応温度と相対活性（37℃を100％としたとき）
pHと相対活性
| 反応温度（℃） | 20 | 25 | 37 | 40 | 45 |
| 相対活性（％） | - | 10 | 100 | 130 | 80 |
| pH | 7.5 | 7.7 | 7.8 | 8.0 |
| 相対活性（％） | 100 | 75 | 33 | 4 |
- 注意事項
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