SOC培地添付
E. coli Competent Cells について
MandelとHigaによる大腸菌における形質転換法の確立は、組換えDNA実験の重要な基礎となった。大腸菌をCaイオン存在下に置くと外来DNA（プラスミド、ファージDNA）を細胞内に取り込む“コンピテント”状態になり、この状態の細胞をコンピテントセルと称している。
組換えDNA実験では、コンピテントセルを用いた形質転換、形質導入等がよく行われるが、効率が高く再現性のよいコンピテントセルの作製は難しいとされている。遺伝子ライブラリーの作製、組換え体プラスミドの作製やサブクローニング等、特に目的とする遺伝子の含量が少ない場合では導入効率の高いコンピテントセルを用いることが重要となる。
タカラバイオでは、Hanahanの方法を改良した新しい方法により、効率の高い8種類のCompetent Cells E. coli HST08 Premium、HST02、HST04 dam－/dcm－、JM109、DH5α、HB101、CJ236、MV1184（これらは全てEK1系の宿主大腸菌である）を調製している。
組換えDNA実験では、コンピテントセルを用いた形質転換、形質導入等がよく行われるが、効率が高く再現性のよいコンピテントセルの作製は難しいとされている。遺伝子ライブラリーの作製、組換え体プラスミドの作製やサブクローニング等、特に目的とする遺伝子の含量が少ない場合では導入効率の高いコンピテントセルを用いることが重要となる。
タカラバイオでは、Hanahanの方法を改良した新しい方法により、効率の高い8種類のCompetent Cells E. coli HST08 Premium、HST02、HST04 dam－/dcm－、JM109、DH5α、HB101、CJ236、MV1184（これらは全てEK1系の宿主大腸菌である）を調製している。
製品説明
pUC系プラスミドを使用して遺伝子ライブラリーの作製、
サブクローニングを行った場合、本宿主菌と組み合わせると、
β-ガラクトシダーゼのα-相補性を利用してX-Galによる組換え体の
選別が容易となる。
内容
| E. coli DH5α Competent Cells | 100 μl×10本 |
| pUC19 DNA (0.1 ng/μl) | 10 μl |
| SOC Medium* | 1 ml×10本 |
* SOC Mediumの組成 ：
【ご注意】| 2％ | Tryptone | |
| 0.5％ | Yeast extract | |
| 10 mM | NaCl | |
| 2.5 mM | KCl | |
| 10 mM | MgSO4 | |
| 10 mM | MgCl2 | |
| 20 mM | Glucose |
SOC Mediumを溶かした際に、稀に沈殿が生じる場合がありますが、品質には全く問題ありません。
沈殿が生じた場合は、室温で混ぜるかもしくは37℃で数分間温めて沈殿を溶かしてご使用ください。
保存
－80℃
E. coli DH5α Genotype
F-, Φ 80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF)U169, deoR, recA1, endA1, hsdR17(rK-, mK+), phoA, supE44, λ-, thi-1, gyrA96, relA1
Cell density
1～2 × 109 bacteria/ml
品質
1）形質転換効率
1 ngのプラスミドDNAで形質転換した場合
100 μl E. coli DH5α Competent Cells/1 ng pUC19 plasmid
＞1 × 108 transformants/1 μg pUC19 plasmid DNA
2）β-ガラクトシダーゼのα-相補性の確認
pUC19 DNAを用いて形質転換を行い、100 μg/mlのアンピシリン、60 μg/ml X-Galを含むLB-寒天培地にプレートした場合、青色のコロニーが出現することを確認している。
1 ngのプラスミドDNAで形質転換した場合
100 μl E. coli DH5α Competent Cells/1 ng pUC19 plasmid
＞1 × 108 transformants/1 μg pUC19 plasmid DNA
2）β-ガラクトシダーゼのα-相補性の確認
pUC19 DNAを用いて形質転換を行い、100 μg/mlのアンピシリン、60 μg/ml X-Galを含むLB-寒天培地にプレートした場合、青色のコロニーが出現することを確認している。
プラスミドスクリーニングに使用する抗生物質と選択濃度
| 抗生物質 | アンピシリン | カナマイシン | クロラムフェニコール | ストレプトマイシン | テトラサイクリン |
|---|---|---|---|---|---|
| 濃度（μg/ml） | 100 | 50 | 20 | 50 | 20 |
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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