Matchmaker Insert Check PCR Mix 2は、PCR酵素、プライマー、dNTPs、バッファーがあらかじめ混合された、酵母コロニーから直接PCR増幅が行える2×濃度のプレミックスPCR試薬である。PCR増幅が難しい酵母コロニー、大腸菌コロニーのいずれからも直接PCR増幅が行える。本製品は、ClontechのMatchmaker Gold Yeast One-Hybrid Library Screening SystemおよびMatchmaker Gold Yeast Two-Hybrid Systemに最適化されており、ライブラリースクリーニングで候補となった陽性クローンのpreyプラスミドのインサートcDNAを簡便にPCR増幅することができる。
Matchmaker Insert Check PCR Mix 2は、全てのMatchmaker GAL4活性化ドメイン(AD)ベクター(pGADT7、pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2、pGAD424、pACT、pACT2、pGAD GH、pGAD GL、pGAD10)に用いることができる。
また、5’プライマー、および3’プライマーが、それぞれ別包装になった製品形態をご希望の場合は、
Matchmaker AD LD-Insert Screening Amplimer Setをご利用ください(※本製品にはプライマーのみが含まれます)。本製品も全てのMatchmaker GAL4活性化ドメイン(AD)ベクターのpreyインサート増幅に用いることができます。なお、5’プライマーは、シーケンスプライマーとしてもご利用いただけます。
図1. Matchmaker Insert Check PCR Mix 2の使用例
Matchmaker Goldシステムを用いたスクリーニングより得られた陽性候補クローンから、ランダムに15コロニーを選び、Matchmaker Insert Check PCR Mix 2を用いてPCR増幅を行った(レーン2~16)。preyプラスミドのインサートcDNAを簡便に解析することができ、次の実験ステップに進めるコロニーを迅速に選択することができる。
レーン1:No template control レーンM1:1 kb ladder レーンM2:100 bp ladder