製品説明
ClontechのIn-Fusionクローニングシステムは、それぞれのDNA断片の末端15塩基が相同であれば、短時間に効率よく、In-Fusion酵素がそれらのDNA断片を融合することができる。制限酵素切断や平滑末端化処理、リガーゼ反応などを行うことなく、1ステップの反応でPCR断片を任意のベクターにクローニングできる。In-Fusion HD Cloning Kitはプレミックスタイプであり、反応時間はわずか15分※、クローニング効率が高く、質の高いクローニングを行える。
効率のよいIn-Fusionクローニングなら、最小限のスクリーニングで適切なクローンが得られる。また、2つのDNA断片の結合のみならず、1度の反応で4つのDNA断片を適切に連結することも可能である(1)。In-Fusionクローニング法はハイスループット(HTP)な系にも有用であり、ハーバード大学医学部(2)やスタンフォード大学医学部(3)、オックスフォード大学(4)などのHTPプロジェクトでも活躍している。
In-Fusion HD Cloning Plusシリーズは、クロンテック製高正確性PCR酵素「CloneAmp HiFi PCR Premix」および形質転換効率の高いコンピテントセル「Stellar Competent Cells」が入ったオールインワンキットである。
※EcoDryは凍結乾燥タイプで、反応時間は37℃ 15分+50℃ 15分である。
In-Fusion反応の概略
※EcoDryタイプの場合は37℃ 15分+50℃ 15分です。
図1. In-Fusionクローニング
- 利用するベクターの末端配列に相同な15塩基を、目的遺伝子増幅用プライマーの5'末端に付加し、目的遺伝子をPCR増幅する。
- 増幅産物がシングルバンドであればCloning Enhancer処理*1を行い、複数のバンドが見られる場合はゲルから精製*2して、In-Fusion酵素で線状化ベクター*3と結合する(In-Fusion反応:50℃、15分/EcoDryタイプは37℃ 15分+50℃ 15分)。
製品名に「CE」が付くキットに含まれるCloning Enhancerは、PCR産物をそのままIn-Fusion反応に使用するための独自の前処理試薬である。PCR終了後の反応液に本試薬を加えて30分間インキュベートするだけで、そのままIn-Fusion反応に使用できる。PCR産物の精製ステップが不要となり、試料のロスも少なくなる。
- In-Fusion反応液で形質転換を行い、目的クローンをスクリーニングする。
*1 Cloning Enhancerを含むセットが便利です(製品コード 638916~638918)。Cloning Enhancerのみの別売もあります(製品コード 639613~639615)。
*2 精製用カラムNucleoSpinを含むセットが便利です(製品コード 638909~638920、638912、638913)。
*3 線状化ベクターは、制限酵素処理や全長のPCR増幅により調製してください。
In-Fusionクローニング製品選択ガイド In-Fusionプライマーの設計
内容
In-Fusion HD Cloning Plus
(製品コード 638909、638910、638911)
・5×In-Fusion HD Enzyme Premix
・pUC19 Control Vector, linearized
・2 kb Control Insert
・CloneAmp HiFi PCR Premix
*1
・Stellar Competent Cells
*2
・NucleoSpin Gel and PCR Clean-up
*3
In-Fusion HD Cloning Plus CE
(製品コード 638916、638917、638918)
・5×In-Fusion HD Enzyme Premix
・pUC19 Control Vector, linearized
・2 kb Control Insert
・CloneAmp HiFi PCR Premix
*1
・Stellar Competent Cells
*2
・Cloning Enhancer
*4
In-Fusion HD EcoDry Cloning Plus
(製品コード 638912、638913)
・In-Fusion HD EcoDry Mix
・pUC19 Control Vector, linearized
5 μl
・2 kb Control Insert
・CloneAmp HiFi PCR Premix*1
・Stellar Competent Cells*2
・NucleoSpin Gel and PCR Clean-up Kit*3
*1 高正確性PCR酵素
*2 形質転換効率の高いコンピテントセル
*3 PCR産物精製用スピンカラム
*4 PCR産物をそのままIn-Fusion反応に使用するための前処置試薬 保存 In-Fusion HD EcoDry Mix:デシケーター内で室温保存
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up:室温
Stellar Competent Cells:-80℃
その他:-20℃
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
- タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
- タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。
また、他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。
- ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
|