イルミナ社次世代シーケンサー用ライブラリー定量キット
- イルミナ社次世代シーケンス用ライブラリーの定量キット
- 最適なライブラリー使用量が確定でき、質の高いシーケンス結果の取得に貢献
- qPCR法を採用しているので低濃度のライブラリーも定量可能
- アダプター付加のDNA断片のみを正確に定量
- プライマー、リアルタイムPCR試薬、検量線作成用スタンダードを含む完全なキット
製品説明
イルミナ社次世代シーケンス解析で質の高いデータを得るには適切な量のライブラリーDNAを用いることが不可欠である。使用するライブラリーDNAの量が不十分だとクラスター密度が低くなり、得られるシーケンスデータ量が少なくなる。ライブラリーDNAの量が多すぎるとクラスター密度が高くなり、得られるデータの質が下がる。電気泳動や分光光度測定に基づく一般的なNGSライブラリー定量方法は感度が低く、アダプターが付加された配列だけを特異的に測定することができない。また、多くの場合、定量には大量のライブラリーサンプルが必要となる。
Library Quantification Kitは、qPCR法に基づいて、イルミナ社NGS反応に使用されているアダプター配列を特異的に検出する高感度なライブラリーDNA定量キットである。本製品は、ライブラリー中にアダプターが付加されていないDNA分子が混じっている場合も、特異的にライブラリー濃度を測定することができる。また、ライブラリー作製の過程で、アダプターライゲーションの確認に利用することも可能である。
本製品はTB Greenを用いたqPCR法のキットで、増幅した二本鎖DNA量に応じてTB Greenの蛍光が検出される。本製品には濃度既知の検量線作成用のスタンダードDNAが含まれており、ライブラリーDNAの絶対定量を行うことが可能である。また、スタンダードDNA（DNA Standards for Library Quantification、製品コード 638325）のみの販売も行っている。
Library Quantification Kitは、qPCR法に基づいて、イルミナ社NGS反応に使用されているアダプター配列を特異的に検出する高感度なライブラリーDNA定量キットである。本製品は、ライブラリー中にアダプターが付加されていないDNA分子が混じっている場合も、特異的にライブラリー濃度を測定することができる。また、ライブラリー作製の過程で、アダプターライゲーションの確認に利用することも可能である。
本製品はTB Greenを用いたqPCR法のキットで、増幅した二本鎖DNA量に応じてTB Greenの蛍光が検出される。本製品には濃度既知の検量線作成用のスタンダードDNAが含まれており、ライブラリーDNAの絶対定量を行うことが可能である。また、スタンダードDNA（DNA Standards for Library Quantification、製品コード 638325）のみの販売も行っている。
■ Terra qPCR Direct TB Green Premix ■ 他社同タイプキットのqPCR試薬
― 様々なGC含量（％）における反応効率 ―
― 様々な鎖長における反応効率 ―
クロンテックのLibrary Quantification Kitに含まれるTerra qPCR Direct TB Green Premix、ならびに他社同タイプキットのqPCR試薬を用いて、様々なGC含量および鎖長を持つDNAをターゲットとした反応を行った。各キットに含まれているスタンダードDNAのqPCR効率を100％として、それぞれのqPCR効率を示した。
他社同タイプキットのqPCR試薬では、GC含量の変動や鎖長が長くなるのに伴いqPCR効率の低下がみられたが、Terra qPCR試薬の効率はほぼ一定であり、ターゲットの種類によるqPCRのバイアスが少ないことが示された。
内容
Library Quantification Kit（製品コード 638324）
- Terra qPCR Direct TB Green Premix
2X Terra qPCR Direct TB Green Premix 1 ml×5 ROX Reference Dye LSR（50X） 200 μl ROX Reference Dye LMP（50X） 200 μl - Primer Mix Kit
5X Primer Mix 1 ml×2 EASY Dilution Buffer 1 ml×3 RNase-Free Water 1 ml×3 - DNA Standards for Library Quantification（製品コード 638325）
DNA Standard（10 pM） 50 μl×2 DNA Standard（1 pM） 50 μl×2 DNA Standard（0.1 pM） 50 μl×2 DNA Standard（0.01 pM） 50 μl×2
反応を確認しているリアルタイムPCR装置
- Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ（製品コード TP950/TP980ほか）
- LightCycler（キャピラリータイプ）（Roche Diagnostics社）
- Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System
Applied Biosystems StepOnePlus Real-Time PCR System（以上、Thermo Fisher Scientific社）
※その他の装置についてはお問い合わせください。
保存
Terra qPCR Direct TB Green Premix：－70℃（融解後は4℃で6ヵ月保存可能）
その他：－20℃
その他：－20℃
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