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【方法】
iPS細胞から心筋細胞に分化誘導を行い、分化誘導開始5日後、18日後、42日後(それぞれday 5、day 18、day 42と表記する)に細胞数が1×104 cellsになるように回収し、プロトコールに従ってそれぞれライセート50 μlを調製した。
さらにプロトコールに従って逆転写反応、リアルタイムPCRを行い、遺伝子発現解析を実施した。
コントロールとして精製したtotal RNA(1×104 cellsからRNA抽出)を用い、同様に遺伝子発現解析を行った。
【結果】 day 5を1とした場合の発現量の遷移を比較したところ、本製品で調製したライセートからも、高純度に精製されたRNAを用いた場合と同等の遺伝子発現のプロファイル結果が得られた。
【方法】
HeLa細胞、Jurkat細胞、293細胞、ヒト皮膚線維芽細胞(NHDF)、およびiPS細胞から誘導した心筋細胞をそれぞれ1×104 cellsになるように回収し、プロトコールに従ってそれぞれライセート50 μlを調製した。さらにプロトコールに従って逆転写反応、リアルタイムPCRを行い、遺伝子発現解析を実施した。
コントロールとして精製したtotal RNA(1×104 cellsからRNA抽出)を用い、同様に遺伝子発現解析を行った。
【結果】 本製品で調製したライセートからも、高純度に精製されたRNAを用いた場合と同等の遺伝子発現のプロファイル結果が得られた。
製品名 | 3735A/3736A | 3737A | 3738A | 3739A | 3735S | 3737S | |
---|---|---|---|---|---|---|---|
1. | CellAmp Washing Buffer*1 | 2.5 ml×5 | 2.5 ml×5 | 2.5 ml×5 | - | 2.5 ml | 2.5 ml |
2. | CellAmp Lysis Buffer II*1 | 1 ml×5 | 1 ml×5 | 1 ml×5 | - | 1 ml | 1 ml |
3. | DNase I for Direct RNA Prep*1 | 200 μl | 200 μl | 200 μl | - | 40 μl | 40 μl |
4. | Stop Solution*1 | 250 μl | 250 μl | 250 μl | - | 50 μl | 50 μl |
5. | PrimeScript RT Enzyme Mix*2 | 200 μl | 200 μl | - | 200 μl | 40 μl | 40 μl |
6. | 5×CellAmp Buffer II*2 | 400 μl | 400 μl | - | 400 μl | 80 μl | 80 μl |
7. | RT Primer Mix*2、3 | 100 μl | 100 μl | - | 100 μl | 20 μl | 20 μl |
8. | RNase Free H2O*2 | 1 ml×2 | 1 ml×2 | - | 1 ml×2 | 1 ml | 1 ml |
9. | TB Green Fast qPCR Mix(2×)(3735A/S)*4 またはProbe qPCR Mix(2×)(3736A/S)*4 | 625 μl×10 | - | - | - | 625 μl×2 | - |
10. | ROX Reference Dye(50×)*4 | 250 μl | - | - | - | 50 μl | - |
11. | ROX Reference Dye II(50×)*4 | 250 μl | - | - | - | 50 μl | - |
*1 | Cell Lysisのための試薬 | 3735A/3736A/3737A/3738A (100回分) | 3735S/3737S (20回分) |
*2 | RT(逆転写)試薬 | 3735A/3736A/3737A/3739A (100回分) | 3735S/3737S (20回分) |
*3 | Oligo dT Primer、Random 6 mersを含む。 | ||
*4 | qPCR試薬 | 3735A/3736A (500回分、25 μl反応系) | 3735S (100回分、25 μl反応系) |
リアルタイムPCR関連実験の各種手法をホームページでご紹介しています。あわせてご参照ください。
TaKaRa qPCR Probeについて
遺伝子発現解析に最適なプライマー・蛍光標識プローブ合成受託サービスです。対象遺伝子のAccession No.や配列情報、遺伝子名、生物種などの情報を連絡いただき、プライマー・プローブのカスタム設計を承ります。 設計後は、プライマー・プローブの配列情報を確認した上で注文いただけます。
TaKaRa qPCR Probeはこちら
製品名 | 容量 | 製品コード | 価格(税別) |
---|---|---|---|
インターカレーター法検出用 TB Green Fast qPCR Mix* |
200回(50 μl反応系) | RR430A | ¥44,000 |
400回(50 μl反応系) | RR430B | ¥84,000 | |
プローブ検出用 Probe qPCR Mix* |
200回(50 μl反応系) | RR391A | ¥35,000 |
400回(50 μl反応系) | RR391B | ¥65,000 |
操作簡便!逆転写用プライマー添加済みのプレミックスタイプ
培養細胞から10分でRT-qPCR用鋳型ライセートを調製
改良型酵素の採用でさらなる高速反応を実現したTB Green® 検出系qPCR試薬
少数細胞から直接cDNAを合成、増幅