SMARTer^® Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit

B細胞は免疫応答における重要な役割を持ち、細胞表面には病原体の特異的分子を認識するB細胞受容体（BCRs）を発現する。BCRプロファイリング（特異的なHおよびL遺伝子セグメントの多様性やクロノタイプを検出）により、健常な個体の免疫応答だけではなく、様々な疾患に対応する免疫応答の解明にもつながる。免疫システムによって発現が異なるクロノタイプを正確に同定することで、B細胞レパトア解析が可能になる。

SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kitは、5’RACE法とNGSテクノロジーを組み合わせることにより、BCRプロファイリングの高感度で正確なアプローチを提供する。複数のBCR遺伝子プライマーを用いて増幅するマルチプレックスPCRによるシステムは、プライマーに起因する感度、特異性およびバイアスに関して課題が見られることが判明しており、その結果、クロノタイプの同定が難しくなることが予想されるが、本キットで用いる5’RACE法では、BCRのH鎖、L鎖の定常領域にアニーリングする単一プライマーですべての可変領域を増幅するため、バイアスの少ない解析が可能になる。

本キットでは、BCR mRNAのV(D)J可変領域全体を含んだライブラリーを作製することで、高感度で再現性の高いB細胞レパトア解析を実現する。本キットで作製されたライブラリーを用いてH鎖、κ鎖、λ鎖の3種類のシーケンスを行うことにより、クロノタイプの正確な同定を行うことができる。

Package 1：－70℃
Package 2：－20℃ Mouse BCR IgG H/K/L Indexing Primer Set HT for Illumina：－20℃

下記の製品は本キット中に含まれません。下記の製品はユーザーマニュアルに記載のProtocolで使用できることが確認されています。他製品では代替はできないため、ご注意ください。

• シングルチャンネルピペット： 10 μl、20 μlおよび200 μl
• 8連チャンネルピペット： 20 μl、200 μl
• フィルターピペットチップ： 10 μl、20 μlおよび200 μl
• 微量遠心機 (1.5 ml チューブ用、0.2 mlチューブまたはストリップ用)

PCR増幅およびバリデーション

• 1st strand cDNA合成用のPCRサーマルサイクラー
• PCR amplification用のPCRサーマルサイクラー
• High Sensitivity NGS Fragment Analysis Kit（Advanced Analytical社 Code. DNF-474）
• Agilent 2100 Bioanalyzer: DNA 1000 Kit（Agilent社 Code. 5067-1504）
• Nuclease-free thin-wall PCR tube（0.2 ml；USA Scientific社 Code. 1402-4700）
• Nuclease-free-low adhesion1.5 ml tubes（USA Scientific社 Code. 1415-2600) または、LoBond tubes（Eppendorf社 Code. 022431021）

SPRI Bead精製

• Agencourt AMPure XP PCR Purification Kit（Beckman Coulter社; 5 ml Code. A63880、60 ml Code. A63881）
• 0.2 ml チューブ用Magnetic Separation Device（SMARTer-Seq Magnetic Separator - PCR Strip：製品コード 635011）など
• 100％ Ethanol