微量の試料から迅速、簡便にtotal RNAを精製
- 単一細胞や微量サンプルからtotal RNAを簡便、迅速に精製
- ゲノムDNA除去カラムの利用により酵素反応によらず混入DNAを除去
- 細胞溶解液の清澄化とゲノムDNA除去を1カラム1ステップにまとめた効率的作業
- 2-ME、TCEPの添加不要な新Lysis Bufferを採用
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製品説明
NucleoSpin RNA Plus XSは、メンブレンの直径を小さくし、メンブレン接面を狭くした独自のXSスピンカラムを採用した製品で、微量の細胞、組織サンプルから高濃度のtotal RNAを精製できる。更にNucleoSpin gDNA Removal Column XSにより、DNaseによる酵素処理を行うことなく、スピンカラムに1回通すだけでゲノムDNAを除去することができるため、高純度のRNAを迅速簡便に調製することができる。
NucleoSpin RNA Plus XSによるRNA精製では、試料とする微量の細胞や組織を2-MEやTCEPの添加不要な新規Lysis Bufferを用いて溶解するとともに内在性のRNaseを失活させる。NucleoSpin gDNA Removal Column XSによりライセートの清澄化とゲノムDNAの除去を行い、NucleoSpin RNA Plus XS Columnによりtotal RNAの精製を行う。
これらのRNA抽出の操作は室温で行うことができる。
* RNA integrity number
NucleoSpin RNA Plus XSによるRNA精製では、試料とする微量の細胞や組織を2-MEやTCEPの添加不要な新規Lysis Bufferを用いて溶解するとともに内在性のRNaseを失活させる。NucleoSpin gDNA Removal Column XSによりライセートの清澄化とゲノムDNAの除去を行い、NucleoSpin RNA Plus XS Columnによりtotal RNAの精製を行う。
これらのRNA抽出の操作は室温で行うことができる。
| 原理 | シリカメンブレン法（2カラム） |
| 形状 | XSスピンカラム |
| サンプル量 | 培養細胞：1～105 cells 組織： ～5 mg |
| 精製サイズ | ＞100 bases |
| 回収量 | 500～2,000 ng（HeLa細胞、105 cells） 0.05～0.2 ng（HeLa細胞、101 cells） 2.5～8 ng（マウス肝臓、0.5 μg） 0.1～0.5 ng（マウス脳、0.5 μg） |
| A260/280 | 1.9～2.2 |
| A260/230 | 1.5～2.5 |
| 標準的RIN＊ | ＞8 |
| 溶出液量 | 5～30 μl |
| 精製時間 | 18分 |
| 結合容量 | 110 μg |
NucleoSpin RNA Plus XS (MN)、および他社製品を用いて10～104個のHeLa細胞からRNAを精製し、RT-qPCRによってRNA収量を比較した。NucleoSpin RNA Plus XSでは他社製品と比較し高い収量が得られた。
NucleoSpin RNA Plus XS (MN)、および他社製品を用いて10～104個のHeLa細胞からRNAを精製し、qPCRによって精製溶液中の残存ゲノムDNA量を比較した。NucleoSpin RNA Plus XSにより精製されたRNA溶液中のゲノムDNAの混入量は非常に少ないことが分かった。
NucleoSpin RNA Plus XSを用いて1～1×105個のHeLa細胞からtotal RNAを抽出し、溶出液10 μlのうち2 μlをone-step RT-qPCR解析に用いた（各3回試行）。その結果、1細胞からもロスの少ない効率的なRNA抽出が可能であった。NucleoSpin RNA Plus XSを用いることで、微量サンプルから高収率で再現性の高いRNA抽出が可能であることが示された。
内容
・Lysis Buffer LB1
・Lysis Buffer LB2
・Binding Solution BSXS
・Wash Buffer MDB
・Wash Buffer WB2 (Concentrate)
・RNase-free H2O
・NucleoSpin gDNA Removal Column XS（黄リング）
・NucleoSpin RNA Plus XS Column（青リング、Collection Tubes付）
・Collection Tubes (2 ml)
・Collection Tubes (1.5 ml)
・Lysis Buffer LB2
・Binding Solution BSXS
・Wash Buffer MDB
・Wash Buffer WB2 (Concentrate)
・RNase-free H2O
・NucleoSpin gDNA Removal Column XS（黄リング）
・NucleoSpin RNA Plus XS Column（青リング、Collection Tubes付）
・Collection Tubes (2 ml)
・Collection Tubes (1.5 ml)
保存
室温
本製品以外に必要な試薬、機器（主なもの）
試薬
・96～100％エタノール
器具
・1.5 mlマイクロチューブ
・ピペットチップ（滅菌済）
・ピペット
・高速遠心器
・サンプル破砕用ホモジナイザー
操作手順
用途
- 微量の培養細胞、ヒト、動物組織からのRNA精製
- 精製RNAはリアルタイムRT-PCR、ノーザンブロット、アレイ解析、RNA-Seqなどに使用可能
Protocols
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