Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ
LightCycler/LightCycler 480 システム(Roche Diagnostics社)
CFX96 Real-Time PCR Detection System(Bio-Rad社)
■ 添加なし | ■ ヘマチン80 μM | ■ ヘパリン0.125 U | ■ メラニン 100 ng |
■ フミン酸100 ng | ■ タンニン酸 1,000 ng | ※ 検出されず |
5種類の反応阻害物質を反応液に添加し、One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix、従来製品および他社製品の阻害物質への耐性をテストした。One Step PrimeScript III RT-qPCR Mixは「添加なし」とのCt値の差が少なく、各種反応阻害物質への耐性が高いことが示された。
鋳型RNA:Human HeLa Cell Total RNA
ターゲット:Human ACTB遺伝子
プローブ:Takara qPCR Probe
Human HeLa Cell Total RNA 1 pg~100 ngを鋳型として、One Step PrimeScript III RT-qPCR Mixを用いてACTB、GAPDH、PPIA、YWHAZ遺伝子のマルチプレックス発現解析を行った。全ターゲットにおいて、R2>0.99 を満たしていた。
○ Standard
- Actin E = 97.1% R2= 0.996 Slope=-3.393 y-int=33.278
- YWHAZ E = 95.6% R2= 0.997 Slope=-3.433 y-int=35.528
- GAPDH E = 100.6% R2= 1.000 Slope=-3.307 y-int=35.400
- PPIA E = 97.1% R2= 0.999 Slope=-3.395 y-int=33.800
Human HeLa Cell Total RNA(製品コード 636543)、1 pg~1 μgを鋳型として、ACTB遺伝子の発現解析をOne Step PrimeScript III RT-qPCR Mix, with UNGを用いて、3日間に分けて行った。その結果、One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix, ,with UNGは高い直線性(Rsq: 1)と安定した増幅効率(Eff. ≧92.5%)を示した。また、検量線間の各RNA量におけるCt値の最大差は1 pgにおける1.02が最大であった(データ示さず)。
操作簡便な1 step RT-qPCR試薬(2コンポーネントタイプ)
1 step RT-qPCR用の第一推奨試薬(非特異的増幅を効果的に抑制)
高感度検出に威力を発揮!1 step RT-PCR試薬
コンポーネントのプレミックス化で操作性がアップ
高いPCR阻害物質抵抗性と高速性を両立したプローブ検出専用試薬