重要なのは出現コロニー数ではなく、目的クローンの取得率！
In-Fusionは他社シームレスクローニングキットよりも陽性コロニー率が圧倒的に高く、目的サンプル取得までの時間を大きく削減します。
In-Fusionクロー二ングは、制限酵素を使用せず、目的インサートとベクターを1ステップ反応でシームレスに繋げることができる技術です。
In-Fusion Snap Assembly Master Mixの製品ページはこちら
In-Fusionのようなシームレスクローニング技術をベースとしたキットは他社からも販売されていますが、実は大きな違いがあるのをご存知ですか？
その違いを以下にご紹介します！
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In-Fusionのようなシームレスクローニング技術をベースとしたキットは他社からも販売されていますが、実は大きな違いがあるのをご存知ですか？
その違いを以下にご紹介します！
■ In-FusionとA社同等キットの目的クローン取得率の比較（タカラバイオ取得データ）
各反応において、2.7 kbの線状化ベクターに3断片（MBP：1.1 kb、PROF12：0.7 kb、AcGFP1：0.7 kb）を同時にインサートするマルチクローニングを行った。
| In-Fusion Cloning | A社キット | ||
| 反応条件 | 50℃、15分 | 50℃、15分 | 50℃、60分 |
| ベクター ＋ インサート | 89コロニー | 111コロニー | 392コロニー |
| Negative Control （インサートなし） | 1コロニー | 39コロニー | 78コロニー |
| 目的クローンの取得率 | 100％（26/26） | 19％（5/26） | 73％（19/26） |
A社キットではNegative Controlにおけるコロニー数が多く、さらに目的クローン取得率も低い、空ベクターを持つコロニーが多く出現することが分かります。また、ベクター＋インサートで得られたコロニーでもシーケンスの結果、In-Fusionはほぼすべてが正しい配列でしたが、A社キットはエラーが入ったものが多数見られました（data not shown）。この違いにより、In-Fusionの目的クローン取得率の方が圧倒的に高いのです！
ではなぜIn-Fusionの方が正しい配列のクローンを得られるのか？その秘密はこちら！
In-Fusionクローニングの正確性の秘密 －他社シームレスクローニングとの技術的な違い －
★ 他社のシームレスクローニング技術では… ベクターとインサートをつなぐために、ポリメラーゼとDNAリガーゼを使います。そのときにエラーが入ると考えられます。 |
★ In-Fusionクローニングでは… ベクターとインサートをつなぐために、ポリメラーゼもDNAリガーゼも使用しません（ギャップが生じても、大腸菌形質転換後に自動的に埋まります）。このため、変異が入らず、より正確性の高いクローニングが可能となります。 |
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