NucleoSpin^® RNA Plant and Fungi

植物・糸状菌などの試料を適切な条件で破砕、溶解を行う。
乳鉢ですりつぶす場合
Buffer PFL 500 μlとBuffer PFR 10～50 μl（試料により選択^*2）を1.5 ml Tubeまたは2 ml Tube（各自で用意）で混合する。
十分に冷やした乳鉢中、適切な量の試料を液体窒素で冷やしながらすりつぶす。
粉状になった試料をBuffer PFL/PFRを分注したTubeに加えて速やかに混合する。
56℃で5分間保温する（でんぷん質の多い試料の場合はこの処理を行わないこと）。
14,000×g、1分間遠心して残渣を除く。

Bead Tube（別売）を使用する場合
Buffer PFL 500 μlとBuffer PFR 10～50 μl（試料により選択^*2）をMN Bead Tubes Type Gで混合する。
適切な量の試料をこのBead Tubesに加え、自動破砕機などで破砕する（破砕条件は各機器に合わせて設定する）。
56℃で5分間保温する（でんぷん質の多い試料の場合はこの処理を行わないこと）。
Bead TubesからSteel Beadsを取り除く。
14,000×g、1分間遠心して残渣を除く。

NucleoSpin RNA Plant and Fungi Filter Column（緑のリング）をCollection Tube（2 ml）にセットする。
1のライセートをカラムに加え、14,000×g、1分間で遠心する。
十分にろ過できない場合は、20,000×g、3分間で追加の遠心を行う。
遠心後、Tube内で沈殿が生じることがあるが、除去する必要はない。

ろ液にBuffer PFB 500または750 μl（試料により選択^*2）を添加し、よく混合する。室温で5分静置する。

NucleoSpin RNA Plant and Fungi Column（水色のリング）をCollection Tube（2 ml）にセットする。
3の溶液650 μlをカラムに添加し、14,000×g、30秒間遠心する。ろ液を捨て、再び同じCollection Tubeにセットする。
すべてのライセートをカラムに 添加するまでこの作業を繰り返す。
カラムを新しいCollection Tube（2 ml）にセットする。

1回目の洗浄
Buffer PFW1 500 μlをカラムに添加し、14,000×gで1分間遠心する。
カラムを新しいCollection Tube（2 ml）にセットする。

2回目の洗浄
Buffer PFW2^*1 500 μlをカラムに添加し、14,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、再び同じCollection Tubeにセットする。

3回目の洗浄
Buffer PFW2^*1 500 μlをカラムに添加し、14,000×gで1分間遠心する。
夾雑物を除去しにくい試料（ブドウの葉など）の場合、この洗浄ステップを追加する
ことが望ましい。
カラムを新しいCollection Tube（1.5 ml）にセットする。

RNase-free H₂O 50 μlをカラムに加え、約1分間室温で静置したのち、
14,000×gで1分間遠心する。
溶出したRNA溶液は、－20℃または－70℃で保存する。