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Q&A

Exonuclease III

Exonuclease III

Q1 DNAにExo III を働かせた後、アガロース電気泳動するとスメアしている。非特異的なnucleaseがコンタミしているのでは?
A1 Exo III はニックにも作用します。DNAを制限酵素で切断するとき、過剰の酵素を用いたり、長時間反応させるとStar活性等によりDNAにニックが入ることがあります。
また、Exo III反応後、一本鎖部分を残したまま電気泳動しても正確なサイズは分かりません。MungBean Nuclease、またはS1 Nucleaseで一本鎖部分を削ってから電気泳動を行ってください。
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