DNA Ligation Kit

λgt11 EcoR I armへのEcoR I 分解pBR322 DNAの挿入

λgt11のEcoR I arm(脱リン酸化したもの)250 ngに、EcoR I 分解pBR322 DNA 25 ng(4,361 bp)を加えたDNA溶液をプロトコールにしたがって、10分~16時間反応させる。 このライゲーション溶液20 μl中4 μlをpackagingに用い、ファージ粒子を形成させる。こうして得られたファージをE. coli Y1090(r)に感染させプラークを形成させた。その結果を下表に示した。このとき、通常のライゲーションの反応液中で、T4 DNA Ligase 350 Uを用いて26℃で反応させた場合をコントロールとした。

表 形質転換効率の時間的推移

反応時間 DNA Ligation System T4 DNA Ligase
10分 8.5 × 106 1.8 × 106
16時間 3.1 × 106
(透明プラーク数/μg λ gt11)

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