Plant DNA Isolation Reagent

反応性を重視する増幅にはTaKaRa Ex Taq Hot Start Version（製品コード RR006A/B）、MightyAmp DNA Polymerase（製品コード R070A/B）を推奨している。TaKaRa Ex Taq HSは核酸量が多いサンプルでも良好に働く。植物由来のPCR阻害物質を多く含むサンプルの場合、MightyAmpを用いることで反応性がさらに向上する。

正確性を求める増幅には、PrimeSTAR GXL DNA Polymerase（製品コード R050A/B）を推奨している。High Fidelity PCR酵素の多くは核酸量が多いサンプルからの増幅が不得意であるが、PrimeSTAR GXLは核酸量の多いサンプルにも幅広く対応でき、またPCR阻害物質にも比較的強い特性を有している。

【方法】

10～20 mgの植物組織（シロイヌナズナの幼葉、トマトの幼葉、あるいはホウレンソウの成葉）から抽出したゲノムDNA溶液を鋳型として、それぞれの酵素の推奨条件でPCRを実施し、電気泳動により増幅バンドを確認した。


Target遺伝子と増幅サイズ
TaKaRa Ex Taq HSのPCR条件
PrimeSTAR GXLのPCR条件

【結果】

1-1.TaKaRa Ex Taq HS



1-2.PrimeSTAR GXL



それぞれPCR反応液4μlをアプライ、1 % Agarose L03「TAKARA」

1：ゲノムDNA溶液原液	2：ゲノムDNA溶液2倍希釈液	3：ゲノムDNA溶液5倍希釈液
4：ゲノムDNA溶液10倍希釈液	5：ゲノムDNA溶液20倍希釈液	6：ゲノムDNA溶液40倍希釈液
M：250bp DNA Ladder(Dye Plus)

図7-1．抽出したゲノムDNAを鋳型としたPCR増幅

【方法】

100 mgの植物組織（ホウレンソウの成葉、あるいはトマトの幼葉）から抽出したゲノムDNA溶液を鋳型として、それぞれの酵素の推奨条件でPCRを実施し、電気泳動により増幅バンドを確認した。


Target遺伝子と増幅サイズ
TaKaRa Ex Taq HSのPCR条件
MightyAmpのPCR条件

【結果】

1-1.ホウレンソウ

TaKaRa Ex Taq HSでも良好な増幅が見られたが、MightyAmpを用いることでさらに増幅量がアップした。

1-2.トマト

トマト幼葉由来のサンプルは比較的多くのPCR阻害物質を含んでいるため、PCR増幅が難しい傾向が見られる。TaKaRa Ex Taq HSでは40倍希釈液で初めて増幅が確認できたが、MightyAmpを用いると2倍希釈液でも良好な反応を示した。

それぞれPCR反応液4μlをアプライ、1 % Agarose L03「TAKARA」

1：ゲノムDNA溶液原液	2：ゲノムDNA溶液2倍希釈液	3：ゲノムDNA溶液5倍希釈液
4：ゲノムDNA溶液10倍希釈液	5：ゲノムDNA溶液20倍希釈液	6：ゲノムDNA溶液40倍希釈液
M：250bp DNA Ladder(Dye Plus)

図7-2．抽出したゲノムDNAを鋳型としたPCR増幅

【方法】

100 mgのトマトの幼葉から抽出したゲノムDNA溶液を鋳型として、PrimeSTAR GXLの標準プロトコールおよび高速プロトコール（2倍量の酵素を使用）でPCRを実施し、電気泳動により増幅バンドを確認した。


Target遺伝子と増幅サイズ
PCR条件

【結果】

植物由来の阻害物質を多く含むサンプルには、PrimeSTAR GXLの高速PCRプロトコールを推奨する。また、酵素量を2倍量かつ伸長時間を1 min/ kbで反応を行うとさらに反応性が改善する場合もある。

それぞれPCR反応液4μlをアプライ、1 % Agarose L03「TAKARA」

1：ゲノムDNA溶液原液	2：ゲノムDNA溶液2倍希釈液	3：ゲノムDNA溶液5倍希釈液
4：ゲノムDNA溶液10倍希釈液	5：ゲノムDNA溶液20倍希釈液	6：ゲノムDNA溶液40倍希釈液
M：250bp DNA Ladder(Dye Plus)

図7-3．抽出したゲノムDNAを鋳型としたPCR増幅