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Application

Tks Gflex™ DNA Polymerase

クローニングのためのインサート調製の効率化

ヒト心臓由来のtotal RNAから、PrimeScript II 1st strand cDNA Synthesis Kit(製品コード 6210A)を用いて逆転写反応を行い、cDNAを調製した。このcDNA 2 μl(total RNA 500 ng相当)を鋳型として、20種類の遺伝子のORF全長を、pCMV-HA-CベクターにクローニングするためのIn-Fusion用プライマーとTks Gflexを用いてPCRを行った。 Tks Gflexを使用することで、20種類すべてのターゲットORFを標準条件で増幅することができた。

どんなターゲットでもTks Gflexにお任せください。クローニングの大幅な効率アップに役立ちます。


            M:250 bp DNA Ladder M2:λ-Hind III digest
ターゲット遺伝子リスト
レーンNo. 遺伝子名 鎖長  GC レーンNo. 遺伝子名 鎖長 GC
(bp) (%) (bp) (%)
1 PLN 159 39.6 11 KCNQ1 2,031 64.2
2 NKX2-5 339 68.4 12 DTNA 2,232 49.5
3 FABP3 402 50 13 JUP 2,238 62.2
4 MYL2 501 50.4 14 CEP85L 2,418 42
5 CMA1 744 52.2 15 PKP2 2,514 53.3
6 CITED2 813 63.8 16 KCNH2 3,480 65.9
7 GATA4 1,329 68.8 17 JAG1 3,657 54
8 MEF2C 1,392 49.4 18 MYH6 5,820 57.6
9 CD36 1,419 39.5 19 SCN5A 6,048 57.3
10 ADRB1 1,434 71.8 20 RYR2 14,904 46.2


Tks GflexのPCR条件:
94℃ 1 min.
 ↓
98℃ 10 sec.
55℃ or 60℃ 15 sec.
68℃ 30 sec./kb
 
35 cycles
上記はすべて弊社取得データです。


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