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Application

pHEK293 Ultra Expression Vector

顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)の発現

pHEK293 Ultra Expression Vector I/II(製品コード 3390/3392)

接着性HEK293T細胞
あらかじめ12ウェル細胞培養用プレートに培養しておいたHEK293T/17細胞に、TransIT-293 Transfection Reagent(製品コード MIR2704~2706)を使用して、キットのプロトコールに従ってトランスフェクションを行った。各実験で使用したプラスミドを表2に示した。

浮遊性HEK293細胞
あらかじめ125 ml三角フラスコに培養しておいた浮遊性HEK293細胞(Free Style 293-F cells、Thermo Fisher Scientific社製)に、キットのプロトコールに従ってトランスフェクションを行った。各実験で使用したプラスミドを表2に示した。

表2
 細胞G-CSF発現ベクターpHEK293 Enhancer
Vector
プラスミドの種類プラスミド量
(μg)
プラスミド量
(μg)
1
2
3
4
5
接着性
HEK293T細胞
pBApo-CMV/G-CSF
Vector I/G-CSF
Vector II/G-CSF
Vector II/G-CSF
Negative Control
1
1
1
1
-
-
-
0.008
0.2
-
6
7
8
9
10
浮遊性
HEK293細胞
pBApo-CMV/G-CSF
Vector I/G-CSF
Vector II/G-CSF
Vector II/G-CSF
Negative Control
30
30
30
30
-
-
-
0.24
6
-

トランスフェクションから2、5、7日後に培養上清を回収し、Human G-CSF Assay Kit( IBL社Code. 27131)を用いてG-CSF定量を行った。結果を図9に示した。その結果、本製品を使用することで、一般的なCMVプロモータを利用した発現ベクター(pBApo-CMV DNA)と比較して、3~5倍のG-CSF発現量の向上が認められた。

G-CSF 発現量の定量
図9.G-CSFの定量
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