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Application

MightyPrep reagent for DNA

牛乳中のサルモネラ菌DNAの抽出

MightyPrep reagent for DNA(製品コード 9182)
PCRでの検出
牛乳にサルモネラ菌を添加した懸濁液10μl より本製品およびA社試薬を用いてDNA抽出液を調製し、以下のPCR酵素でサルモネラ菌DNAのPCR検出を行った。
・MightyAmp DNA Polymerase Ver.3(製品コード R076A/B)
・Tks Gflex DNA Polymerase(製品コード R060A/B)

牛乳中のサルモネラ菌DNA検出   M 100 bp ladder
  1 MightyPrep reagent for DNA
  2 A社試薬

 MightyAmp DNA
Polymerase Ver.3
Tks Gflex DNA Polymerase
DNA抽出液使用量2.5 μl2.5 μl
Total volume25 μl25 μl
ターゲットinvA(605 bp)invA(605 bp)
PCR条件
98℃
2 min
98℃
60℃
68℃

10 sec.
15 sec.
40 sec.
 30 cycles
98℃
60℃
68℃

10 sec.
15 sec.
20 sec.
 30 cycles
qPCRでの検出
Salmonella enterica var. Enteritidisの菌体懸濁液を牛乳で希釈した試料より、本製品及びA社試薬を用いてDNA抽出液を調製し、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (製品コード RR420)を用いて、サルモネラ菌のDNAを検出した。
A社試薬を用いた場合より、MightyPrep reagent for DNAを使用した場合、Ct値が低くなり良好な検出ができた。

反応条件
DNA抽出液使用量2.5 μl
Total volume25 μl
ターゲットinvA
PCR条件
95℃
95℃
60℃

30 sec.
5 sec.
30 sec.
 40 cycles

MightyPrep
牛乳中のサルモネラ菌DNAの抽出
牛乳中のサルモネラ菌DNAの抽出

A社試薬
牛乳中のサルモネラ菌DNAの抽出
牛乳中のサルモネラ菌DNAの抽出

 
Ct値
 Sample
MightyPrep
reagent for DNA
A社試薬
 原液
14.41
30.31
 1/10希釈液
17.76
38.91
 1/100希釈液
21.11
37.58
 1/1000希釈液
25.39
-
 1/10000希釈液
29.20
-
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