Lenti-X™ レンチウイルス遺伝子発現システム

pLVX-Puro（図1）をはじめLenti-Xシリーズのすべてのレンチウイルスベクターには、レンチウイルス特異的LTR、パッケージング配列（Ψ）、cDNAを挿入するマルチクローニングサイト（MCS）、ピューロマイシン耐性遺伝子、ならびにパッケージングやウイルス力価、導入遺伝子の発現を増強するWPREおよびcPPTエレメントが含まれている。
WPRE 配列は293T 細胞でのパッケージングを促進して高力価に寄与し、標的細胞中のmature mRNAの産生を促して導入遺伝子の発現を強化する（1）。cPPTエレメントは感染の際にウイルスゲノムの核への移行を促し、遺伝子導入効率を高める（2）。


図1. pLXV-Puroのベクターマップ
pLVX-Puroベクターには、レンチウイルス特異的LTR、パッケージング配列（Ψ）、目的遺伝子を挿入するマルチクローニングサイト（MCS）、ピューロマイシン耐性遺伝子、並びにパッケージングやウイルス力価、導入遺伝子の発現を増強するWPREおよびcPPTエレメントが含まれている。

効率の高いパッケージング

Lenti-X Expression Systemには、Lenti-X Packaging Single Shots（VSV-G）が含まれる。Lenti-X Packaging Single Shots（VSV-G）は、レンチウイルスのパッケージングと複製に必要なベクターと、トランスフェクション試薬Xfect Transfection Reagentが予め1チューブ中にプレミックスされた製品である。目的遺伝子を搭載したレンチウイルスベクター水溶液を加え溶解後、10 cmディッシュ中の293T細胞培養に加えるだけで、高タイターのレンチウイルスベクターを作製することができる。得られる高力価ウイルス上清は濃縮せずに直接使用できる。

高力価＆迅速な選択が可能

Lenti-X Expression Systemを用いて、高力価のpLentiX-Puroウイルス培養上清を取得し、この段階希釈液を293T培養細胞へ感染させた（図2）。感染細胞を10 cm培養プレート上で再度プレーティングし、ピューロマイシンを用いて形質導入クローンの選択を行い、得られた安定形質導入株のコロニーを染色した。わずか0.1 μlの上清で感染させた細胞から数百コロニーが得られ、1 μlで感染させた細胞から生じたコロニーはプレート全体に広がっていた。これらの結果は、標準的なpLentiX-Puroウイルス培養上清が高力価で極めて感染性の高いことを示している。

Lenti-X Expression Systemは、レンチウイルス調製のための包括的なシステムである。このシステムでは、安全で様々なアプリケーションに使用可能な高い力価のレンチウイルス上清が簡単に調製可能である。

図2. 形質導入細胞のピューロマイシンによる選択
Lenti-X HTX Packaging Systemを用いて調製したpLVX-Puro上清の各液量（μl）で、293T細胞の感染を行った。ピューロマイシン選択を9日間行って耐性コロニーを形成させ、クリスタルバイオレットで染色した。

ご注意：拡散防止措置に関して
Lenti-Xシリーズ製品を用いて作製されたpLVX系レンチウイルスベクターは、細胞ゲノムに組み込まれたプロウイルスにおいてLTRプロモーター活性を有しています。
このようなレンチウイルスベクターについて、文部科学省ポジションペーパー「Human immunodeficiency virus 1型（HIV-1）の増殖力等欠損株等の解釈について」（令和7年3月21日）では、一定の要件を満たし、かつ野生型HIV-1またはHIV-2と共存しない条件下で使用される場合には、増殖力等欠損株として取り扱うことができるとの考え方が示されています。
一方で、野生型HIV-1またはHIV-2と共存する条件下では、自立的な増殖力および感染力を再獲得する可能性があります。

本製品を用いた実験の実験区分、必要な拡散防止措置および関連する手続きについては、使用条件によって異なる場合があります。ご使用にあたっては、ご所属機関の遺伝子組換え実験安全委員会等にご確認いただき、適切な管理のもとでご使用くださいますようお願いいたします。

参考資料：
文部科学省ポジションペーパー 「Human immunodeficiency virus 1型（HIV-1）の増殖力等欠損株等の解釈について」（令和7年3月21日）