採水当日に、迅速な生菌検出が可能

レジオネラ属菌検査 生菌検出法(EMA-qPCR法)

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はじめに

レジオネラ属菌の遺伝子検査法には、菌の生死に関わらず遺伝子を検出する方法(生菌死菌検出法)と、生菌由来の遺伝子のみを検出する方法(生菌検出法)の2種類がある。
平成29年8月に改訂発行された「第4版レジオネラ症防止指針」(公益財団法人日本建築衛生管理教育センター)には、従来のqPCR法に加えて、迅速検査法のひとつとして「生菌のみを検出する遺伝子検査法」が収載され、LC EMA-qPCR法やEMA-qPCR法が紹介されている。
EMA-qPCR法では、EMA処理による死菌由来DNAからのPCR増幅の抑制とリアルタイムPCRとを組み合わせ、「迅速性」と「生菌選択性」を兼ね備えた遺伝子検査法であり、採水当日に、迅速な生菌検出(結果判定)が可能である。
本法では、18時間の液体培養を行わず、ろ過濃縮検水をそのままEMA処理し、リアルタイムPCRにより検出するので、LC EMA-qPCR法に比べ、より迅速であることがメリットである。

レジオネラ属菌の遺伝子検査法について

検査法 迅速性 平板培養法
との相関性
用途
平板培養法 × 標準法
LC EMA-qPCR 迅速スクリーニング検査など
EMA-qPCR 迅速スクリーニング検査など
qPCR × 衛生状態の把握など
レジオネラ属菌の遺伝子検査について

EMA-PCR法の原理について

EMA-PCR法とは、選択的膜透過性色素(EMA:ethidium monoazide)が死菌由来DNAを修飾し、修飾を受けたDNAがPCR増幅できない状態となることを利用して、生菌由来DNAを選択的に検出する方法である。

EMA-PCR法 EMA-PCR法の原理について、詳しくはこちらもご覧ください。

EMA-qPCR法の検査の流れ

EMA-qPCR法の検査の流れ

EMA-qPCR法の各工程で使用する試薬

ステップ 関連製品
1 EMA処理 Viable Legionella Selection Kit for PCR Ver.2.0(製品コード 7714)
LED Crosslinker 12(製品コード EM200)
2 DNA抽出 Lysis buffer for Legionella(製品コード 9181)
NucleoSpin Tissue XS(製品コード 740901.10/.50/.250)
3 リアルタイムPCR CycleavePCR Legionella(16S rRNA)Detection Kit(製品コード CY240/CY240S)
Thermal Cycler Dice Real Time System III with PC(製品コード TP970)
Thermal Cycler Dice Real Time System II(製品コード TP900、TP960)
Thermal Cycler Dice Real Time System Lite(製品コード TP700、TP760)
参考 EMA処理の成否チェック Control Test Kit(Viable Bacteria Selection)(製品コード CY290)

製品パンフレット・ハンドブック

概要や操作方法などについて詳しく記載しています
  

レジオネラ属菌遺伝子検査・3法の比較

分類 手法 概要 結果判定 検査法の特長 詳細
生菌
検出法
1. LC EMA-qPCR 液体培養(18時間)後に、EMA処理およびqPCR検出を行う。 検査開始
2日目
液体培養とEMA処理の組合せにより、確実かつ高感度に生菌選択的な検出ができる。 詳しくはこちら
2. EMA-qPCR 液体培養を行わず、ろ過濃縮検体をそのままEMA処理し、qPCR検出を行う。 検査開始
1日目
LC EMA-qPCR法に比べ、18時間の液体培養が必要ないためより迅速(採水当日に判定可能)。 詳しくは上記をご覧ください
生菌死菌
検出法
3. qPCR ろ過濃縮検体からqPCR検出を行う。 検査開始
1日目
菌の生死にかかわらず遺伝子を検出する。死菌の存在も潜在的な汚染リスクとして評価できる。 詳しくはこちら
訪問説明・デモンストレーション申し込みボタン
レジオネラ属菌遺伝子検査スタートアップキャンペーンページ

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