SP6 RNA Polymeraseによるlinearized DNAからのRNAの合成
反応液組成
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37℃、30 minインキュベーション * pSP65 vectorのSP6 promoter下流にpBR322のTetr geneをクローニングしたものである。
** 10 × Bufferとして製品に添付 図1〔32P〕CTPのRNAへの取り込み ★：10 Uでの取り込みを1としたときの相対値
図2 SP6 RNA Polymeraseの酵素量によるRNA合成量の変化
| 40 mM | Tris-HCl（pH7.5）** |
| 6 mM | MgCl2** |
| 10 mM | DTT |
| 2 mM | スペルミジン** |
| 0.01% | BSA |
| 0.45μg | linearized DNA* |
| 0.5 mM | ATP、GTP、UTP |
| 12.5μM | 〔32P〕CTP（図1）または0.5 mM CTP（図2） |
| 10～600 U | cloned SP6 RNA Polymerase/20μl |
37℃、30 minインキュベーション * pSP65 vectorのSP6 promoter下流にpBR322のTetr geneをクローニングしたものである。
** 10 × Bufferとして製品に添付 図1〔32P〕CTPのRNAへの取り込み ★：10 Uでの取り込みを1としたときの相対値
図2 SP6 RNA Polymeraseの酵素量によるRNA合成量の変化
| Lane 1, 10： | λ-Hind III fragment |
| Lane 2： | Linearized Template（LT） |
| Lane 3： | LT + 20 U SP6 RNA Pol. |
| Lane 4： | LT + 35 U 〃 |
| Lane 5： | LT + 50 U 〃 |
| Lane 6： | LT + 70 U 〃 |
| Lane 7： | LT + 100 U 〃 |
| Lane 8： | LT + 150 U 〃 |
| Lane 9： | LT + 200 U 〃 |
