ヒトゲノムDNAを鋳型としたLA PCR
| 鋳型 DNA | ： | ヒトゲノムDNA |
| Target | ： | β-globin cluster regionおよびTPA gene region |
| 増幅サイズ | ： |
17.5 kb β-globin cluster region 21.5 kb β-globin cluster region 27 kb TPA gene region |
■ 反応液組成
| 使用量 | 終濃度 | |
| ヒトゲノムDNA (500 ng/μl) | 1 μl | 500 ng/50 μl |
| 10 × LA PCR Buffer II (Mg2+ plus) | 5 μl | ［1 × ］ |
| dNTP Mixtur | 8 μl | 各 400 μM each |
| Sense Primer (20 pmol/μl) | 0.5 μl | 0.2 μM |
| Antisense Primer (20 pmol/μl) | 0.5 μl | 0.2 μM |
| TaKaRa LA Taq | 0.5 μl | 2.5 U/50 μl |
| 滅菌精製水 | 34.5 μl | |
| Total | 50 μl |
■ PCR条件
94℃、1 min
↓
↓
72℃、10 min
↓
| 98℃、10 sec. 68℃、15 min.(17.5 kb、21.5 kb) or 20 min.(27 kb) |
30 cycles |
72℃、10 min
■ 結果
 |
各5 μl/泳動 0.4% Agarose gel Lane 1：λ-Hind III digest Lane 2：17.5 kb Lane 3：21.5 kb Lane 4：27 kb Lane 5：High Molecular Weight DNA Markers (BRL) |
