LA PCR用Genome DNA Setを用いたLA PCR
LA PCR用genome DNA Setより、各DNAと、対応するPrimer setを用いてTaKaRa LA Taqにより増幅を行った。
■ 反応液組成
| 使用量 | 最終濃度 | |
| genome DNA | 1 μl | human genome：500 ng E.coli genome：100 ng |
| 10×LA PCR Buffer II (Mg2+ free) | 5 μl | ×1 |
| 25 mM MgCl2 | 5 μl | 2.5 mM |
| dNTP Mixture | 8 μl | 400 μM each |
| Primer #1 | 1 μl | 0.2 μM |
| Primer #2 | 1 μl | 0.2 μM |
| TaKaRa LA Taq | 0.5 μl | 2.5 U/50 μl |
| 滅菌精製水 | up to 50 μl |
■ 操作上の注意
- キットの内容物は室温～37℃で完全に溶解した後、ピペッティングあるいはチューブを上下することによりよく撹拌する。vortexの使用はなるべく避ける。10×LA PCR Buffer、TaKaRa LA Taqを撹拌する場合は、泡立ちあるいは酵素の失活を防ぐために特に注意深く、ゆっくりとピペッティングする。 また、各内容物は使用するまで氷上で保存する。
- 反応液は、反応開始前にピペッティングにより軽く撹拌する。この際、vortexは絶対に使用してはいけない。
■ PCR条件
0.6％ Agarose gel Lane 1：λ-Hind III digest Lane 2：ヒトゲノムDNA増幅産物 8 μl（増幅サイズ17.5 kb） Lane 3：E.coliゲノムDNA増幅産物 4 μl（増幅サイズ20 kb） Lane 4：λ-Hind III digest |
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